UPLC-MS/MS Analysis of Aldosterone in Plasma for Clinical Research

Význam tématu

Aldosteron je klíčový steroidní hormon regulující krevní tlak a jeho přesné stanovení v plazmě je zásadní pro výzkum kardiovaskulárních a endokrinologických onemocnění. Moderní metody UPLC-MS/MS s automatizovanou přípravou vzorků nahrazují tradiční radioimunologické postupy, odstraňují nutnost radioizotopů a zvyšují analytickou selektivitu i citlivost.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo navrhnout a validovat rychlou a reprodukovatelnou metodu pro kvantifikaci aldosteronu v lidské plazmě, využívající SPE extrakci na Oasis MAX µElution Plate v automatizovaném formátu a chromatografii UPLC s detekcí na tandemové hmotnostní spektrometrii.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy o objemu 200 µL byly automatizovaně zpracovány na platformě Tecan Freedom Evo 100/4. K extrakci byl použit Oasis MAX µElution Plate, který prošel kondicionací a sekvenčním mytím, následovalo eluční činidlo 70 % metanol. Chromatografická separace probíhala na ACQUITY UPLC I-Class systému se sloupcem CORTECS UPLC C18 (2,1×100 mm, 1,6 µm) při teplotě 45 °C a při gradientu vody a methanolu. Detekce na Xevo TQ-S v režimu MRM (ESI negative) používala přechody 359,2>189,2 (kvantifikátor) a 359,2>297,2 (kvalifikátor). Analýzu a kvantifikaci zajišťoval software MassLynx s modulem TargetLynx.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala analytickou citlivost 42 pmol/L (S/N >10:1, RSD <20 %). Celková přesnost pro QC úrovně 99, 500 a 2000 pmol/L byla ≤9,8 % RSD a opakovatelnost ≤8,2 % RSD. Linearita metody (42–4161 pmol/L) vykázala koeficient determinace r2 >0,996. Nebyly pozorovány interferenční látky ani systémové přenosy. Matricové efekty (1,03–1,20) byly kompenzovány interním standardem, výsledný net matricoý efekt byl 0,90–1,10. Porovnání s nezávislou LC-MS/MS metodou ukázalo Demingovu regresi y = 1,07x – 22,94 a Bland-Altmanův průměrný bias –4,9 % bez statisticky významné odchylky.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizované zpracování vzorků zkracuje dobu analýzy a snižuje riziko laboratorních chyb. Metoda umožňuje spolehlivé stanovení nízkých hladin aldosteronu s vysokou selektivitou a citlivostí, což usnadňuje klinický výzkum a monitorování pacientů v endokrinologii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj se očekává v rozšíření kapacity multivookových destiček, hlubší integraci s laboratorními informačními systémy a aplikaci pro multiplexní stanovení dalších steroidů. Vývoj nových sorbentů a pokročilého softwaru pro zpracování dat podpoří komplexnější klinické studie.

Závěr

Popsaná UPLC-MS/MS metoda poskytuje citlivou, selektivní a vysoce přesnou kvantifikaci aldosteronu v plazmě s plně automatizovanou přípravou vzorků. Díky robustní validaci a nízkému objemu požadovaného vzorku je vhodná pro výzkumné laboratoře zaměřené na kardiovaskulární a endokrinologické aplikace.

Reference

• Foley D., Calton L. UPLC-MS/MS Analysis of Aldosterone in Plasma for Clinical Research. Waters Corporation, 2015.
• Golden West Biologicals. MSG4000 stripped human serum, product information.
• Cerilliant; IsoSciences. Certified reference materials for aldosterone and labeled internal standards.
• Waters Corporation. ACQUITY UPLC I-Class System; CORTECS UPLC C18 Column; Oasis MAX µElution Plate; Xevo TQ-S Mass Spectrometer; MassLynx Software.