Adding Mass Selective Detection to Improve Analytical Sensitivity and Maximize Confidence in Results for Impurity Profiling by UHPLC

Význam tématu

Impurity profiling v analýze léčiv je zásadní pro zajištění kvality a bezpečnosti farmaceutických produktů.
Standardní LC-UV metody často narážejí na omezenou citlivost u nechromoforových látek, koeluující špičky a nutnost spolehlivé identifikace neznámých látek při vyšetřování OOS výsledků.
Přidání hmotnostně selektivní detekce (MSD) výrazně zvyšuje jistotu a citlivost analýzy, umožňuje detekovat slabě absorbující degradáty a rozlišit koeluující impurity.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat přínos integrace single quadrupole MSD do běžné LC-UV analýzy impurit Enalapril maleátu.
Hlavní body:

• Porovnání citlivosti a selektivity UV a MS detekce
• Identifikace slabě UV-aktivních impurit
• Analýza koelujících špiček
• Potvrzení identity pomocí knihovníh vyhledávání

Použitá metodika a instrumentace

Chromatografie:

• Agilent 1260 Infinity II Binary Pump, Sampler a Diode Array Detector
• Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 2.1×50 mm, 2.7 μm, 55 °C
• Mobilní fáze: 0.1 % kyselina mravenčí ve vodě (A), 0.1 % kyselina mravenčí v methanolu (B)
• Gradient: 20→90 % B v čase 0–12 min, průtok 0.8 mL/min

MS detekce:

• Agilent InfinityLab LC/MSD XT s ESI-AJS
• M/z 65–600, pozitivní režim, fragmentor 125 V, EMV 250 V
• Diverter valve pro odklon eluátu hlavní API špičky do odpadu
• OpenLAB CDS pro akvizici, zpracování a knihovní vyhledávání

Hlavní výsledky a diskuse

1. UV detekce zachytila sedm impurit a API s ~98.7 % podílem, avšak s nízkou mAU odpovědí a omezenou citlivostí.
2. MSD detekce odhalila dvě další impurity, včetně slabe UV-aktivní látky s m/z 280, identifikované jako Impurity B (match score >96 %).
3. Diverter valve účinně ochránila MS zdroj tím, že odklonila eluát vysokokoncentrované API špičky, aniž by narušila reprodukovatelnost zadržovacích časů.
4. MS spektrometrie umožnila rozlišení koelujících špiček (m/z 383 a 405) skrytých v UV trace, čímž se zabránilo mylnému odhadnutí čistoty API.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšení analytické citlivosti pro impurity se slabou UV absorpcí
• Spolehlivá identifikace koelujících látek díky m/z charakteristice
• Potvrzení identity pomocí knihovny a nástrojů OpenLAB CDS
• Udržení integrity a robustnosti MS zdroje díky diverter valve

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření aplikace MSD do rutinních QA/QC laboratoří farmacie
• Integrace vysoce selektivních hmotnostních detektorů pro screening neznámých degradátů
• Využití pokročilých databází a strojového učení pro automatizované vyhodnocení impurit
• Další miniaturizace a kompaktní konstrukce LC-MS systémů pro on-site a rychlé testování

Závěr

Propojení tradiční LC-UV analýzy s MSD ve stejném chromatografickém sledu významně zvyšuje spolehlivost a citlivost impurity profilingu.
Metoda umožňuje detekci slabších látek, odhaluje koeluce a pevně potvrzuje identitu vzorků, což je klíčové pro farmaceutické QA/QC rutiny.

Reference

1. Siji Joseph, Hua Dong. Adding Mass Selective Detection to Improve Analytical Sensitivity and Maximize Confidence in Results for Impurity Profiling by UHPLC. Agilent Technologies, Application Note, 2017.