Chiral Analysis of Sulfur Amino Acids with Agilent InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T Columns

Význam tématu

Aminokyseliny hrají klíčovou roli v biologických procesech i v průmyslu; chirální formy D- a L-enantiomerů vykazují odlišnou biologickou aktivitu. Schopnost rychle a spolehlivě oddělit tyto enantiomery je zásadní pro farmaceutický výzkum, nutriční doplňky a kontrolu kvality.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo demonstrovat účinnost Agilent InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T kolony pro separaci nederivovaných D- a L-enantiomerů cysteinu a methioninu. Analýza byla provedena v režimu UHPLC s ELSD detekcí a methanol/ammonium formátovým pufrem jako mobilní fází.

Použitá metodika a instrumentace

Experiment byl realizován na přístrojovém vybavení Agilent 1290 Infinity II LC; separace probíhala na koloně InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T (2,1×100 mm, 2,7 μm). Mobilní fáze: 70 % methanolu a 30 % 25 mM ammonium formátu, pH 3,0. Průtok byl nastaven na 0,21 ml/min, teplota kolony 30 °C, objem injekce 1 μl. Detekce ELSD s teplotou evaporátoru 30 °C a průtokem dusíku 1 SLM.

• Agilent 1290 Infinity II Flexible Pump
• Agilent 1290 Infinity Autosampler s kapilárním ohřevem
• Agilent InfinityLab Multicolumn Thermostat
• Agilent 1290 Infinity II ELSD detektor
• InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T kolona

Hlavní výsledky a diskuse

Bylo dosaženo baseline separace enantiomerů cysteinu i methioninu během 4 minut. Pro cystein byly hodnoty retenčních faktorů k1=0,86, k2=1,50, selektivity 1,75 a rozlišení Rs=4,31. Pro methionin k1=0,84, k2=1,76, selektivita 2,08 a Rs=5,58. Výsledky potvrzují vysokou účinnost a selektivitu glykopeptidové faze na povrchu zrcadlících částic.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje:

• rychlou a reprodukovatelnou separaci D/L enantiomerů v běžných reverzně-fázových mobilních fázích,
• kompatibilitu s hmotnostní spektrometrií díky MS-friendly pufru,
• efektivní provoz při nízkém tlaku a krátkých analýzách.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace na další chiralní aminokyseliny a malé molekuly, integrace se systémem LC–MS/MS pro strukturální potvrzení a vývoj rychlejších režimů separace kombinujících superficially porous částice a přenosné systémy pro in-line kontrolu kvality.

Závěr

Agilent InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T kolona prokázala vysokou účinnost, stabilitu a spolehlivost při separaci nederivovaných chiralních aminokyselin. Nabízí praktické řešení pro farmaceutickou analytiku i QC laboratoře.

Reference

• William J. Long; Chiral Analysis of Sulfur Amino Acids with Agilent InfinityLab Poroshell 120 Chiral-T Columns; Application Note; Agilent Technologies; září 2019.