Příprava vzorků, Software, HPLC, LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníProteomika
VýrobceAgilent Technologies
Význam tématu
Proteomika přináší jedinečnou schopnost odhalit složení, dynamiku a modifikace proteinů v komplexních biologických vzorcích, což je nezbytné pro pochopení patologických procesů, biomarkerů a optimalizaci různých průmyslových odvětví.
Cíle a přehled studie
Tento dokument popisuje komplexní portfolio nástrojů Agilent určených pro objevnou i cílenou proteomiku. Klíčové cíle zahrnují:
- Identifikaci a kvantifikaci proteinů v různých aplikačních oblastech (základní a klinický výzkum, zemědělství, potravinářství, farmaceutický vývoj, bioenergie).
- Prezentaci optimalizovaných pracovních postupů zajišťujících vysokou citlivost, reprodukovatelnost a spolehlivost výsledků.
Použitá metodika a instrumentace
Metodika zahrnuje kapalně chromatografii spojenou s hmotnostní spektrometrií (LC/MS/MS) v režimech závislé a nezávislé akvizice dat (DDA, DIA). Klíčová instrumentace:
- LC systémy: 1290 Infinity II, Infinity UHPLC Nanodapter (100–900 nL/min nanoflow).
- MS detektory: 6500 Series Q-TOF s iFunnel a Jet Stream, 6400 Series Triple Quadrupole, 6550 Q-TOF.
- Ionizace: Agilent Jet Stream pro standard-flow, G1992A nanoESI pro nanoflow.
- Přípravné automatizované platformy: AssayMAP Bravo (purifikace, tryptické štěpení), Multiple Affinity Removal System (deplece vysoce abundantních proteinů).
- Softwarové nástroje: Spectrum Mill (identifikace), Skyline (cílená DIA), Mass Profiler Professional s modul Pathway Architect (statistika, vizualizace), Profinder (extrakce dat), Scaffold (integrace výsledků).
Hlavní výsledky a diskuse
Objevná proteomika s DDA na iFunnel Q-TOF zvýšila počet identifikovaných peptidů díky pokročilým algoritmům výběru předkurzorů a automatizované iterativní akvizici. Jet Stream technologie přinesla 3–5× vyšší citlivost oproti konvenčnímu ESI, což umožnilo detekci nízko abundantních proteinů při vyšší robustnosti než nanoflow. Cílené přístupy (DIA) s All Ions MS/MS a širokopásmovou izolací efektivně využívají vysokou hmotnostní přesnost Q-TOF pro spolehlivou kvantifikaci.
Přínosy a praktické využití metody
- Biomarker discovery: identifikace peptidů pro diagnostiku nemocí.
- Zemědělství: mapování proteinových drah pro optimalizaci plodin.
- Potravinářství: ověřování autenticity a kvality potravin.
- Farmaceutický výzkum: sledování toxicity a farmakodynamiky léčiv.
- Bioenergie: kontrola syntézy proteinů v produktech syntetické biologie.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se další integrace víceúrovňových omických dat a umělé inteligence pro hlubší biologické poznatky. Automatizace přípravy vzorků a rozšíření cloudových platforem pro sdílení dat zvýší efektivitu i reprodukovatelnost. Miniaturizace a přizpůsobení workflow pro klinické a průmyslové nasazení dále podpoří široké využití proteomiky.
Závěr
Agilent nabízí komplexní řešení pro objevnou i cílenou proteomiku, která kombinují vysokou citlivost, spolehlivost a flexibilitu. Pokročilá LC/MS instrumentace společně s výkonným softwarem podporuje výzkumníky od počáteční identifikace po kvantitativní analýzy, což významně urychluje aplikace v biomedicíně i průmyslu.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.