Which LC-MS/MS Platform is Most Appropriate for the Quantitative Analysis of Steroids in Serum for Clinical Research? WP129

Význam tématu

Steroidy jsou klíčové endokrinní regulátory ovlivňující metabolismus, imunitu a reprodukční funkce. Přesné stanovení koncentrace steroidů v séru je nezbytné pro klinický výzkum a diagnostiku hormonálních poruch.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout citlivou a specifickou LC-MS/MS metodu pro simultánní kvantifikaci širokého spektra steroidů a porovnat výkonnost tří Thermo Scientific TSQ platform: Fortis, Quantis a Altis.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorku byla použita jednoduchá liquid-liquid extrakce 200 µl séra s methyl-tert-butyl ether, následné vysušení a rekonstituce ve směsi vody a methanolu. Analýza probíhala na systému Vanquish HPLC s kolonkou Accucore C18 (100×2,1 mm, 2,6 µm) při gradientu vody s 0,2 mM fluoridem amonným a methanolu. Detekce se prováděla ve vybraných SRM přechodech na triple kvadrupólových spektrometrech TSQ Fortis, TSQ Quantis a TSQ Altis v HESI modu. Software zahrnoval Xcalibur 3.1, TSQ Altis Tune 2.1 a TraceFinder 4.1.

• HPLC systém Vanquish Horizon
• Kolonka Accucore C18 100×2,1 mm, 2,6 µm
• MS platformy TSQ Fortis, TSQ Quantis, TSQ Altis
• Mobilní fáze: voda + 0,2 mM NH4F / methanol
• Software: Xcalibur, TSQ Altis Tune, TraceFinder

Hlavní výsledky a diskuse

• Kompletní separace steroidů za 11 min při koeficientu determinace > 0,995
• Lineární rozsahy 0,1–1000 ng/ml, LOQ 1–100 pg/ml, LOD 1–5 pg/ml
• Opakovatelnost a přesnost < 10 % CV pro všechny analyty
• TSQ Altis dosáhl nejnižších LOQ, zejména pro DHT a pregnenolony
• TSQ Quantis a Fortis poskytly robustní výsledky pro cortisol, progesteron, androstenedion aj., menší citlivost pro DHEA a DHT

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a jednoduchá extrakce bez derivatizace vhodná pro vysokou propustnost
• Metoda je přenositelná mezi různými TSQ platformami
• Umožňuje stanovení steroidů na úrovni pg/ml pro klinické studie a výzkum
• Vhodné pro monitorování léčebných zásahů a diagnostiku hormonálních stavů

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se integrace s plně automatizovanými systémy pro zvýšení propustnosti a reproducibility. Dále se rozšiřuje využití vyššího chromatografického rozlišení, miniaturizace analýzy a rozšíření panelu o konjugované a fázové metabolity.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda pro simultánní kvantifikaci širokého spektra steroidů v séru prokázala vysokou citlivost, přesnost a přenositelnost na různých TSQ platformách. TSQ Altis nabízí nejlepší výkon pro nízké hladiny steroidů, zatímco TSQ Quantis a Fortis jsou vhodné pro rutinní aplikace.

Reference

• Koal T. et al. Standardized LC–MS/MS based steroid hormone profile-analysis. J Steroid Biochem Mol Biol. 2012;129:129–138.
• Levi M. et al. Fast, Sensitive, and Simultaneous Analysis of Multiple Steroids in Human Plasma by UHPLC–MS–MS. LCGC. 2015;186.