Quantification of Nitrosamine Impurities in Metformin Using Agilent GC/MS/MS Instrumentation

Quantifikace nitrosaminových nečistot v metforminu pomocí GC-MS/MS

Význam tématu

Nitrosaminové nečistoty, jako je NDMA, se v roce 2018 prokázaly v různých lécích včetně metforminu. Regulátoři nařídili výrobním firmám snížit hladiny těchto potenciálně karcinogenních sloučenin na stopové úrovně. Citlivá analýza nitrosaminů je proto klíčová pro zajištění bezpečnosti pacientů a splnění přísných mezinárodních norem.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a ověřit kompletní metodu pro stanovení pěti nitrosaminů (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA) v surovině i tabletách metforminu. Použity byly tři způsoby extrakce vzorku, chromatografie na DB-WAX kolonce a detekce na Agilent GC/MS/MS aparatuře.

Použitá metodika a instrumentace

Sample-prep metody:

• Metoda 1: přímá extrakce 500 mg vzorku dichlormethanem s vnitřním standardem NDMA:C13-d6.
• Metoda 2: dvoufázové dělení mezi vodou a dichlormethanem.
• Metoda 3: kyselá extrakce (1 N HCl) následovaná dichlormethanovým extraktem.

Chromatografie a detekce:

• GC: Agilent 8890, DB-WAX 30 m × 0,25 mm, 0,5 μm, pulsed splitless vstřik 2 μl, helium 1 ml/min, program teplot od 40 °C do 250 °C.
• MS/MS: Agilent 7010B TQ s High Efficiency Source (70 eV), MRM režim optimalizovaný pro 2–3 přechody každého analyta.
• Kalibrace: 2,5–100 ng/ml, linearita R2 > 0,999 pro všechny analyty.

Použitá instrumentace

• Agilent 8890 GC se 7693A automatickým vzorkovačem
• Agilent 7010B triple quadrupole GC/MS/MS s HES zdrojem
• DB-WAX kapilární kolona (30 m × 0,25 mm, 0,5 μm)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje limity kvantifikace pod 0,001 ppm (NDBA <0,0025 ppm). Recoveries v LOQ úrovni byly 80–120 % s RSD <5 %. Opakovatelnost šesti injekcí standardu 40 ng/ml vykázala RSD <2 %. Metody 2 a 3 minimalizují problémy s lepivými extrakty tablet, metoda 1 je nejjednodušší pro surovinu, ale nevhodná pro některé formulace.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivé monitorování nitrosaminů v API i finálních přípravcích metforminu s vysokou citlivostí a specifitou. Agilent 8890/7010B nabízí dálkové monitorování a automatizované diagnostiky pro minimální odstávky analytického provozu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit na jiné třídy nitrosaminů, adaptovat pro další farmaceutické matricie a integrovat do plně automatizovaných linek QC. Využití HES zdroje a optimalizačních nástrojů umožní sledování stále nižších hladin kontaminantů.

Závěr

Vyvinutá GC-MS/MS metoda poskytuje robustní, vysoce citlivé stanovení pěti nitrosaminů v metforminu. Splňuje požadavky mezinárodních regulačních orgánů, nabízí vynikající linearitu, přesnost i opakovatelnost.

Reference

1. European Medicines Agency. Committee for Medicinal Products for Human Use (CHMP): Information on nitrosamine impurities.
2. European Medicines Agency. Update on metformin diabetes medicines, 2018.
3. U.S. Food and Drug Administration. Updates and press announcements on NDMA in metformin.
4. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. Methods for determination of nitrosamines in metformin.
5. Andrianova A., Quimby B., Churley M. Automated MRM Method Development for US EPA Method 8270 with the Agilent MassHunter Optimizer for GC/TQ. Agilent Technologies Application Note 5994-2086EN, 2020.