Determination of a Genotoxic NDMA Impurity Using the High-Resolution Agilent 6546 LC/Q-TOF in Ranitidine Drug Substance and Drug Products

Význam tématu

Nitrosaminy, zejména N-nitrosodimethylamin (NDMA), jsou klasifikovány jako pravděpodobné lidské karcinogeny. Objevení stopových množství NDMA v ranitidinu vedlo k celosvětovým stažením léčiv. Citlivá a spolehlivá analytická metoda pro detekci těchto nitrosaminů je proto klíčová pro zajištění kvality a bezpečnosti farmaceutických produktů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie je vyvinout vysoce citlivou a přesnou metodu založenou na kombinaci kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie (LC/Q-TOF) pro kvantifikaci NDMA v léčivé látce a formě ranitidinu. Studie demonstruje lineární odezvu, nízký mez detekce a reprodukovatelnost analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byl použit systém Agilent 1290 Infinity II UHPLC vybaven vysokotlakým čerpadlem, autosamplerem, termostatovanou kolonkou a detektorem HR-UV. Analytická kolona Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18 (4,6 × 150 mm, 2,7 μm) byla provozována při 40 °C s mobilními fázemi: A) 0,2 % kyseliny mravenčí ve vodě, B) methanol. Gradientní program a průtok 0,3–0,5 mL/min zajišťují optimální separaci. Vzorky byly injikovány v objemu 20 μL při teplotě multisampleru 6 °C.
Zdroj APCI pracoval v pozitivním ionizačním módu s teplotou plynu 300 °C, zdrojovým napětím 3 000 V a hmotnostním rozsahem m/z 70–170. Kvantifikace probíhala na Agilent 6546 LC/Q-TOF s vysokým rozlišením a přesností měření. Data se sbírala a vyhodnocovala pomocí softwaru MassHunter LC/MS a Quantitative Analysis for TOF.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla detekčního limitu 0,15 ng/mL (S/N > 18) a kvantifikačního limitu 0,25 ng/mL (S/N > 47). Kalibrační křivka v rozsahu 0,25–100 ng/mL vykázala koeficient lineární regrese R2 > 0,9997 při váženém lineárním fitu (1/x). Získaná přesnost byla v rámci ±20 % očekávaných hodnot, reprodukovatelnost (RSD) nižší než 15 % a pro 1 ng/mL úroveň dosahovala RSD ~2 %. Recovery experimenty pro 6 ng/mL v API a 48 ng/mL v tabletách prokázaly průměrné výtěžky ~94 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje citlivé sledování NDMA přímo v matričce ranitidinu s vynikající přesností a reprodukovatelností. Je vhodná pro kontrolu kvality surovin a hotových léčiv v souladu s regulačními požadavky FDA a EMA. Díky vysokému rozlišení Q-TOF lze spolehlivě rozlišit cílový iont od interferencí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze dále rozšířit na stanovení dalších nitrosaminů v různých léčivých přípravcích. Integrace s rychlými screeningovými pracovními postupy (RapidFire-MS/MS) a automatizovaná správa dat posílí efektivitu laboratorních analýz. Dalším krokem je validace v rámci průmyslových standardů a rozšíření aplikace na environmentální a potravinářské vzorky.

Závěr

Vyvinutá LC/Q-TOF metoda na bázi Agilent 6546 poskytuje spolehlivou, citlivou a reprodukovatelnou analýzu NDMA v ranitidinu. Díky nízkým detekčním limitům a vysoké přesnosti splňuje metodu farmaceutické a regulační nároky na zajištění bezpečnosti léčiv.

Reference

1. USFDA guidance document: Development and Validation of a RapidFire-MS/MS Method for Screening of Nitrosamine Impurities.
2. USFDA guidance document: Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (LC-HRMS) Method for the Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs.
3. Agilent Technologies Application Note: Determination of Nitrosamine Impurities Using the High-Resolution Agilent 6546 LC/Q-TOF, publication number 5994-1372EN, 2019.
4. FDA guidance document: Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (LC-HRMS) Method for the Determination of NDMA in Ranitidine Drug Substance and Drug Product.
5. FDA Statement: Alerting Patients and Healthcare Professionals to NDMA Found in Samples of Ranitidine.