Determination of NDMA Impurity in Ranitidine Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS

Význam tématu

Detekce stopových nitrosaminů, především N-nitrosodimethylaminu (NDMA), v léčivých přípravcích je klíčová pro zajištění jejich bezpečnosti a souladu s regulačními požadavky. V roce 2019 byly zjištěny karcinogenní nitrosaminy v ranitidinu a příbuzných sloučeninách, což vedlo k rozsáhlým stažením produktů z trhu. Vývoj spolehlivých, citlivých a selektivních analytických metod je zásadní pro prevenci kontaminace a ochranu pacientů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této aplikace bylo vyvinout a validovat kvantitativní metodu založenou na LC/MS/MS s použitím trojitého kvadrupólu Agilent 6470 pro detekci a stanovení NDMA v API ranitidin a finálních tabletách. Metoda má splnit limity detekce i kvantifikace požadované regulačními agenturami (US FDA, EMA, China FDA).

Použitá metodika a instrumentace

Analytická metoda zahrnovala tyto kroky:

• Příprava standardu NDMA ve vodě (1 000 ng/mL) a spikování vzorků
• Příprava vzorků API: 120 mg ranitidinu rozpuštěno ve 4 mL vody
• Příprava vzorků z tablet: drcení tablet, extrakce vodou, centrifugace a filtrace (0,2 µm)

Chromatografické podmínky:

• UHPLC Agilent 1290 Infinity II (pumpa G7120A, multisampler G7167B, termostat G7116B)
• Kolona Agilent Poroshell HPH-C18 4,6×150 mm, 2,7 µm
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě; B: 0,1 % kyselina mravenčí v methanolu
• Gradient 0–14 min (0,3–0,5 mL/min), teplota kolony 40 °C, objem injekce 20 µL
• Diverter ventil pro odklon analytů ranitidinu mimo detektor

MS/MS podmínky:

• Agilent 6470 triple quadrupole LC/MS, APCI pozitivní ionizace
• MRM přechody pro NDMA: m/z 75,1 → 43,1 (kvantifikátor); 75,1 → 58,1 (kvalifikátor)
• Sušící plyn 5 L/min při 300 °C, APCI hořák 350 °C, napětí 4 000 V, rozlišení 0,7/0,7
• Doba setrvání MRM přechodů 200 ms

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla lineárního rozsahu 0,1–100 ng/mL (R2 > 0,9997). Limit detekce (LOD) byl 0,1 ng/mL (S/N > 20), limit kvantifikace (LOQ) 0,25 ng/mL (S/N > 45). Diverter ventil úspěšně oddělil silnou špičku ranitidinu, čímž nedocházelo k saturaci MS.
Opakovatelnost při 1 ng/mL vykázala RSD 0,62 %. Vztah přesnosti na LOQ ukázal odchylku < 20 %. Recovery z API i tablet se pohybovala mezi 86 % a 95 %, což potvrzuje spolehlivost metody při různých maticích.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Vysokou citlivost pro splnění regulatorních požadavků
• Selektivní detekci NDMA i při vysokých koncentracích API
• Krátký doba analýzy (15 min) s minimálním odpadem
• Robustnost a reprodukovatelnost vhodné pro rutinní QC laboratoře

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směřování zahrnuje:

• Rozšíření metody na další nitrosaminy a související sloučeniny
• Adaptace pro složitější farmaceutické matrice a biologické vzorky
• Integrace plně automatizovaného příjmu a předúpravy vzorků
• Využití vysokého rozlišení (HRMS) pro potvrzení struktur nitrosaminů

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda s Agilent 6470 umožňuje citlivou, selektivní a reprodukovatelnou detekci NDMA v ranitidinu. Splňuje požadavky regulačních orgánů a je vhodná pro rutinní kontrolu kvality API a finálních farmaceutických produktů.

Reference

1. U.S. Food and Drug Administration. FDA Updates and Press Announcements: ARB Recalls of Valsartan and Losartan. 2020.
2. FDA. Development and Validation of a RapidFire-MS/MS Method for Screening of Nitrosamine Impurities. Guidance Document. 2019.
3. FDA. LC-HRMS Method for the Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs. Guidance Document. 2019.
4. FDA. LC-HRMS Method for the Determination of NDMA in Ranitidine Drug Substance and Drug Product. Guidance Document. 2019.
5. U.S. Food and Drug Administration. Statement Alerting Patients and Health Care Professionals of NDMA Found in Ranitidine Samples. 2019.
6. Agilent Technologies. Application Note 5994-1383EN: Determination of Nitrosamine Impurities Using the Ultivo Triple Quadrupole LC/MS. 2019.
7. RegistrarCorp. FDA Drugs Definitions. 2020.