Analysis of Aldosterone in Plasma for Clinical Research using the ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S micro System

Význam tématu

Aldosteron je klíčový mineralokortikoidní hormon sledovaný v klinickém výzkumu účinků inhibitorů aldosteronsyntházy. Vzhledem k velmi nízkým koncentracím (<100 pmol/L) v plasmě vyžaduje jeho spolehlivá kvantifikace vysoce selektivní a citlivé analytické metody kombinující účinnou přípravu vzorku a hmotnostní spektrometrii.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo předvést schopnosti systému ACQUITY UPLC I-Class spojeného s Xevo TQ-S micro ke kvantifikaci nízkých hladin aldosteronu v plasmě. Výzkum zahrnoval vývoj a validaci automatizované selektivní extrakce vzorku a následné UPLC-MS/MS analýzy pro podporu klinického výzkumu.

Použitá metodika a instrumentace

Pro extrakci aldosteronu byla využita plně automatizovaná selektivní SPE příprava na platformě Tecan Freedom EVO100/4 s Oasis MAX µElution 96-well destičkami. Vzorky plazmy byly naředěny interním standardem (aldosteron-2H4), síranem zinečnatým, methanolem a kyselinou fosforečnou, poté centrifugovány a aplikovány na upravené SPE destičky. Eluce proběhla vodno-methanolickým roztokem. Na chromatografickém systému ACQUITY UPLC I-Class s kolonkou CORTECS UPLC C18 byla použita gradientní eluce voda/methanol. Detekce probíhala v režimu MRM na Xevo TQ-S micro využívajícím iontový zdroj StepWave pro snížení šumu a zvýšení robustnosti.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivka pokrývala rozmezí 42–4161 pmol/L s korelačním koeficientem r² = 0,9988. Nízký kalibrátor (42 pmol/L) vykázal průměrný poměr signál/šum >25:1 (S/N). Celková přesnost (RSD) všech QC vzorků ve třech úrovních (128, 1011, 2926 pmol/L) nepřekročila 7,2 % během pětidenního experimentu. Vyčištěné extrakty poskytly nízké pozadí a vysokou selektivitu MRM přechodů pro aldosteron (m/z 359,2 > 189,2 jako kvantifikátor a 359,2 > 297,2 jako kvalifikátor).

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká analytická citlivost na nízké koncentrace aldosteronu.
• Automatizovaná příprava vzorků s omezením manuálních chyb a zkrácením doby analýzy.
• Výborná přesnost a opakovatelnost měření pro klinické studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda může být dále rozšířena na vysoce propustné laboratoře, integraci s klinickými platformami a analýzu dalších steroidních hormonů. Vývoj mikro- a nanoflow technik UPLC-MS/MS a pokročilých iontových zdrojů může dále zvýšit citlivost a robustnost analýzy.

Závěr

Byla vyvinuta robustní a citlivá UPLC-MS/MS metoda pro kvantifikaci aldosteronu v plasmě v rozsahu 42–4161 pmol/L. Kombinace automatizované selektivní SPE přípravy s výkonným Xevo TQ-S micro systémem poskytuje vynikající přesnost, linearitu a odolnost vůči matrici.

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC I-Class System
• Xevo TQ-S micro Mass Spectrometer
• Tecan Freedom EVO100/4 automatizovaný systém
• Oasis MAX µElution 96-well SPE destičky
• CORTECS UPLC C18 kolonka
• Software MassLynx 4.1

Reference

Schumacher CD, et al. Aldosterone synthase inhibition for the treatment of hypertension and the derived mechanistic requirements for a new therapeutic strategy. J Hypertens. 2013;31(10):2085–2093.