Two USP Analyses of Pregabalin Using One LC

Význam tématu

Přesné stanovení obsahu a enantiomerní čistoty pregabalinu je klíčové pro zajištění kvality a bezpečnosti léčiv podle monografie USP. Kombinace automatizovaného přepínání kolony a přechod na UHPLC technologie přináší významné zrychlení analýz a úsporu rozpouštědel.

Cíle a přehled studie

Ukázat, jak na jednom LC systému Agilent 1260 Infinity II Prime LC provádět dvě USP metody pro pregabalin – kvantitativní stanovení (assay) a stanovení enantiomerní čistoty – bez manuální výměny kolony. Dále demonstrovat transfer obou metod na UHPLC v souladu s USP kapitolou 621 pro snížení doby analýzy a spotřeby mobilní fáze.

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity II Prime LC: flexibilní čerpadlo G7104C, multisampler s termostatem G7167A, multikolenní termostat s voličem kolony G7116A a 4-pozicní/10-portový ventil G4237A
• Diode Array Detektor HS G7117C s Max-Light 10 mm buňkou G4212-60008
• Software Agilent OpenLab CDS 2.4
• Kolony: ZORBAX Eclipse Plus C18 (4.6×250 mm, 5 µm), ZORBAX Eclipse Plus C18 (2.1×100 mm, 1.8 µm), InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 (2.1×100 mm, 2.7 µm)

Metodika

Assay: izokratická metoda (95:5 voda/ACN), 205 nm, tok 1 mL/min, injekce 20 µL, kolona 4.6×250 mm/5 µm; UHPLC verze: kolona 2.1×100 mm/1.8 µm, tok 0.579 mL/min, injekce 5 µL.
Enantiomerní čistota: derivatizace Marfeyovým činidlem, tok 2 mL/min, kolona 4.6×250 mm/5 µm, detekce 340 nm; UHPLC na sub-2 µm kolóně (tok 0.650 mL/min) nebo Poroshell 2.7 µm (tok 0.772 mL/min).

Hlavní výsledky a diskuse

• System suitability splněna: RSD ≤ 0,73 %, tailing ≤ 1,5, rozlišení ≥ 3 pro assay a ≥ 7 pro enantiomery, S/N ≥ 10.
• Čas analýzy assay UHPLC zkrácen z 25 na 5 min (–80 %), rozpouštědlo –88 %.
• Enantiomerní čistota UHPLC dosahuje rozlišení 7,8 (vs. min. 3) a S/N ~17–19.
• Alternativní Poroshell 2.7 µm kolona přináší 77 % úsporu času a 91 % úsporu rozpouštědla.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizované přepínání kolony umožňuje spolehlivě provádět dvě USP analýzy bez manuálních zásahů, čímž se zvyšuje průchodnost i reprodukovatelnost výsledků. Transfer na UHPLC významně snižuje čas, spotřebu mobilní fáze a provozní náklady v GMP/QC laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření přístupu na další chirální a vícekomponentní farmaceutické analýzy.
• Využití vícepolohových ventilů pro současné měření obsahu, impurit a enantiomerní čistoty.
• Integrace s on-line vzorkováním a pokročilou datovou analýzou pro vysokopropustné prostředí.

Závěr

Agilent 1260 Infinity II Prime LC s voličem kolony umožňuje spustit dva USP testy pregabalinu na jednom přístroji bez ruční výměny kolony. Transfer metod na UHPLC dle USP 621 zkracuje dobu analýzy až o 80 % a šetří až 90 % rozpouštědel při zachování veškerých požadovaných parametrů.

Reference

1. Statista (2011) Top 10 pharmaceutical products by global sales.
2. Stahl S.M. et al. The Diverse Therapeutic Actions of Pregabalin. Trends Pharmacol. Sci. 2013;34(6):332–339.
3. Taylor C.P. et al. Pharmacology and Mechanism of Action of Pregabalin. Epilepsy Res. 2007;73:137–150.
4. USP monografie pregabalin, kap. 621 (2020).