Modernizing the Insulin USP Monograph HPLC Method for Assay and Related Compounds

Význam tématu

Vývoj rychlých a efektivních chromatografických metod pro stanovení inzulínu a souvisejících sloučenin je klíčový pro farmaceutickou kontrolu kvality. Modernizace stávajících USP monografií umožňuje zkrácení analýz, snížení spotřeby rozpouštědel a zachování požadovaných chromatografických parametrů

Cíle a přehled studie / článku

Cílem aplikace bylo adaptovat klasické USP metody pro stanovení inzulínu a souvisejících sloučenin z 5 µm kolonek na moderní 2,7 µm superficially porous particle (SPP) kolony Agilent InfinityLab Poroshell 120 v souladu s revidovanými pokyny USP <621>. Metody zahrnují izokratickou separaci pro kvantifikaci a gradientní separaci pro analýzu impurit

Použitá metodika a instrumentace

Pro obě metody byl použit chromatograf Agilent 1260 Infinity II LC s binárním čerpadlem, multisamplerem, multikolonovým termostatem a Diodovým polem detektorem. Softwarové řízení OpenLab CDS. Kolony:

• InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 4,6 × 50 mm, 2,7 µm
• InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 4,6 × 50 mm, 2,7 µm
• InfinityLab Poroshell 120 SB-C18 a EC-C18 4,6 × 100 mm, 2,7 µm (gradient)
• Originální Pursuit C18 a Polaris C18-A 4,6 × 150/250 mm, 5 µm

Reagencie: HPLC acetonitril, anhydrous sodium sulfate, fosforečná kyselina, ethanolamin, voda PURELAB Chorus. Kalibrační standardy inzulínu a humánního inzulínu

Hlavní výsledky a diskuse

Implementací 2,7 µm SPP kolon InfinityLab Poroshell 120 došlo k redukci doby analýzy o 60 %:

• Assay: z 15 na 6 minut
• Related Compounds (inzulín): z 97 na 39 minut
• Related Compounds (humánní inzulín): z 73 na 29 minut

Veškeré systémové vhodnosti (tailing ≤1,8; rozlišení ≥2,0; RSD ploch ≤1,6 %) a počet desk (N) byly v rámci povolených úprav dle USP <621> bez nutnosti revalidace

Přínosy a praktické využití metody

Metody přinášejí významné úspory času a rozpouštědel, zvyšují denní průchodnost laboratoří a udržují plnou kompatibilitu s farmaceutickými standardy. Umožňují rychlé nasazení v QA/QC prostředí bez opakované komplexní validace

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směřování zahrnuje širší využití SPP technologií pro analýzu peptidů a proteinů, adopci UHPLC systémů pro ultrarychlé separace, integraci zelené analytické chemie a využití umělé inteligence pro automatizovanou optimalizaci metod

Závěr

Revidované USP <621> umožňuje přímý přenos inzulínových metod z 5 µm TPP na 2,7 µm SPP kolony bez revalidace. Agilent InfinityLab Poroshell 120 poskytuje vysokou efektivitu, výrazně zkracuje analýzy a šetří rozpouštědla při zachování chromatografických parametrů

Reference

1. USP Harmonized Standards Home Page Supplement USP Stage 4 Harmonization Official 1 December 2022
2. Fu R Joseph M The Influence of Silica Pore Size and Particle Size on Insulin—a Small Protein Molecule Separation Agilent Technologies application note 5990-9028EN 2011
3. Fu R Converting a CHP Method of Insulin to Agilent Poroshell 120 columns Agilent Technologies application note 5990-9029EN 2011
4. Fu R Converting a CHP Method of Related Compounds Analysis in Human Insulin to Agilent InfinityLab Poroshell 120 Columns Agilent Technologies application note 5994-4756EN 2022
5. USP NF Monographs USP Insulin United States Pharmacopeia 3503
6. USP NF Monographs USP Insulin Human United States Pharmacopeia 3506