Analysis of Trenbolone at low levels in animal tissues using the EVOQ GC-TQ

Význam tématu

Detekce a kvantifikace zakázaných anabolických steroidů v potravinářských živočišných produktech je zásadní pro zajištění bezpečnosti spotřebitelů a plnění legislativních požadavků EU. Trenbolon, metabolizovaný na 17α- a 17β-epimer, patří mezi nejcitlivější sledované látky kvůli své silné anabolické aktivitě a potenciálním zdravotním rizikům i při velmi nízkých koncentracích.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikované poznámky bylo vyvinout vysoce citlivou a specifickou metodu pro stanovení 17α- a 17β-trenbolonu v živočišné tkáni na úrovni sub-ppb (0,1 ng/g). Studie popisuje optimalizaci přípravy vzorku, derivatizace a měření pomocí GC-MS/MS s využitím Selected Reaction Monitoring (SRM) podle požadavků Commission Decision 2002/657/EC.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnovala následující kroky:

• Příprava vzorku: lyofilizace a mletí 15 g svalové tkáně, přidání deuterovaného interního standardu (17β-trenbolon-d3) a fortifikace na 1 ng/g.
• Extrakcce: methanol/acetátový pufr, enzymatická hydrolýza Helix pomatia (15 h, 50 °C), SPE na Envi-ChromP a oddělení androgen-progestagen frakce.
• Derivatizace: MSTFA/I2 (trimethylsilylace) a metylace sodnou methylátou.
• Chromatografie a detekce: cap GC kolona DB-5MS (30 m×0,25 mm×0,25 µm), 2 µL injekce splitless, teplotní program 120 °C (2 min), 15 °C/min do 300 °C (7 min).
  
• MS/MS: EVOQ GC-TQ (Bruker), EI 70 eV, SRM režim, kolizní plyn argon (2,0 mTorr). Pro každý epimer byly monitorovány dva přechody pro potvrzení identity.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla limitu kvantifikace 0,1 ng/g pro oba epimery trenbolonu. Obě složky byly bazálně rozlišené (chromatografická rezoluce > 1) a vybrané SRM přechody byly bez interferencí. Průměrné zotížení celkové metody představovalo ~10 % spíše z důvodu dělené extrakce na dvě frakce. Kvalita analýzy byla ověřena formou kontrolních vzorků (blank, fortifikace 0,5 ng/g).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé a spolehlivé screenování i potvrzení přítomnosti trenbolonu v rámci legislativního monitoringu potravin. Vysoká specificity SRM a nízký LOQ zajišťují včasnou detekci pro ochranu spotřebitelů a dodržování norem EU.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další vývoj ve směru automatizované přípravy vzorků, miniaturizace (micro-SPE, SPME) a aplikace vysokého rozlišení (HRMS) pro multiplexní stanovení většího počtu reziduí. Ambientní ionizační techniky a rychlá chromatografie by mohly dále zkrátit dobu analýzy a zvýšit průtok vzorků ve velkých laboratořích.

Závěr

Popsaná GC-MS/MS metoda na bázi EVOQ GC-TQ nabízí citlivé a specifické stanovení 17α- a 17β-trenbolonu v živočišné tkáni s LOQ 0,1 ng/g. Splňuje požadavky EU decision 2002/657/EC a lze ji efektivně využít pro rutinní kontrolu potravinářských vzorků.

Reference

• Maume T., Le Bizec B., Marchand P., Montrade G., André F. N-Methyl-N-trimethylsilyltrifluoroacetamide-I2 jako derivatizační činidlo pro anabolické steroidy. Analyst, 123(1998)2645–2648.
• Marchand P., Le Bizec B., Gade L., Monteau F., André F. Ultra trace detection of a wide range of anabolic steroids in meat by gas chromatography coupled to mass spectrometry. J. Chromatogr. A, 867(2000)219–231.
• EU Commission Decision 2002/657/EC ze dne 12. 8. 2002 o výkonnosti analytických metod a interpretaci výsledků.
• Council Directive 96/23/EC ze dne 29. 4. 1996 o monitorování vybraných látek a jejich reziduí v živých zvířatech a živočišných produktech.