Advanced Oligonucleotide Characterization Using Multi-Reflecting Time-of-Flight Technology

Význam tématu

Charakterizace oligonukleotidů je klíčová pro potvrzení identity, sledování nečistot a zajištění bezpečnosti a účinnosti terapeutických molekul.

Cíle a přehled studie / článku

Studie demonstruje použití systému ACQUITY Premier UPLC spojeného s hmotnostním spektrometrem Xevo MRT MS pro analýzu antisense oligonukleotidu GEM 91. Pro zpracování dat byly využity aplikace waters_connect INTACT Mass a CONFIRM Sequence.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byla zvolena iontově párová reverzní fáze LC-MS v negativním ESI režimu. Instrumentace:

• ACQUITY Premier UPLC System
• Xevo MRT Mass Spectrometer
• waters_connect INTACT Mass App pro automatizovanou dekonvoluci a potvrzení hmotnosti
• waters_connect CONFIRM Sequence App pro sekvenační analýzu MSE dat

Hlavní výsledky a diskuse

Detekována byla sub-ppm hmotnostní přesnost a rozlišení až 100 000 FWHM, což umožnilo rozlišení koelujících nečistot s rozdílem pouhých 0,05 m/z. Automatizované workflow poskytlo potvrzení hmotnosti FLP s odchylkami do 2 ppm a identifikaci více než 9 syntetických nečistot. Sekvenační analýza MSE prokázala 100% pokrytí fragmentací s přesností pod 2 ppm.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost, široký dynamický rozsah a rychlý throughput díky automatizovaným procesům, což snižuje riziko chyb při ručním zpracování a usnadňuje implementaci v R&D, QC i výrobních laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj integrace pokročilého datového zpracování, využití umělé inteligence pro interpretaci MSE dat, podpora nových chemických modifikací oligonukleotidů a masivní paralelní screening terapeutických kandidátů.

Závěr

Platforma Xevo MRT MS v kombinaci s informatikou waters_connect představuje robustní a efektivní řešení pro detailní charakterizaci oligonukleotidů, zajišťující konzistentní a spolehlivé výsledky ve výzkumu i výrobě.

Reference

1. Intact Mass Confirmation Analysis on the BioAccord LC-MS System for a Variety of Extensively Modified Oligonucleotides. Waters Corporation, 2020.
2. A Xevo G3-based Workflow for Purity Determination, Intact Mass Measurement, and MS/MS Sequencing of Impurities Detected in Synthetic Oligonucleotides. Waters Corporation, 2024.
3. An automated compliance-ready LC-MS workflow for intact mass confirmation and purity analysis of oligonucleotides. Waters Corporation, 2020.