Sensitive Quantitation of Glucagon-like peptide-1 (GLP-1) Analog Tirzepatidein Plasma Using Automated LC-MS/MS workflow

Význam tématu

Glukagon-like peptid-1 (GLP-1) agonisté, mezi které patří i tirzepatid, představují průlom v léčbě obezity a diabetu 2. typu. Pro farmakokinetické a toxikokinetické studie je klíčové vyvinout vysoce citlivé a reprodukovatelné bioanalytické metody umožňující kvantifikaci nízkých koncentrací v plasmatických vzorcích.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo navrhnout plně automatizovaný LC-MS/MS postup pro kvantitativní stanovení tirzepatidu v lidské plazmě s nízkou mezí detekce a širokým dynamickým rozsahem. Studie porovnala klasickou organickou precipitaci s pokročilým čištěním na AssayMAP RP-S kartáčcích.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy (100 µl) byly sráženy směsí acetonitrilu a methanolu (1:1), sušeny a rehydratovány. Následovalo automatizované čištění na Agilent AssayMAP Bravo platformě s RP-S kartáčky, které bylo optimalizováno v několika krocích:

• Podmínění a ekvilibrace kartáčků 80 % ACN a vodou
• Natažení vzorku ve vodě
• Proplach vodou a 10 % ACN v pufru NH4COOH pH 10
• Eluce 5 % formiové kyseliny v 80 % ACN

Chromatografická separace probíhala na AdvanceBio Peptide Mapping kolóně (2,1×150 mm, 2,7 µm) při 80 °C s gradientem z 30 na 95 % acetonitrilu v 10 minutách. Analýzu prováděl Agilent 1290 Infinity II Bio LC v kombinaci s 6495D Triple Quadrupole MS. Vybrané MRM přechody: 1204.4→396.2 (kvantifikátor), 1204.4→299.2 (kvalifikátor) pro tirzepatid a 1029.4→1238.1 pro vnitřní standard semaglutid.

Hlavní výsledky a diskuse

Použití AssayMAP RP-S čisticích stepů zvýšilo citlivost metody přibližně pětinásobně oproti samotné precipitaci. Mez kvantifikace (LLOQ) dosáhla 0,05 ng/mL a lineární rozsah se rozkládal od 0,05 do 1000 ng/mL (R²=0,996). Intra- a interdenní přesnost a přesnost (bias, CV) na čtyřech úrovních QC vzorků splnily regulační kritéria (±20 %).

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální objem startovací plazmy 100 µL
• Široký dynamický rozsah (4,5 řádu velikosti)
• Vyšší citlivost a reprodukovatelnost díky automatizaci
• Možnost vysokopropustného zpracování klinických a preklinických studií

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizované platformy pro přípravu vzorků se stanou standardem v bioanalytice díky jejich robustnosti a škálovatelnosti. Dalšími směry jsou multiplexní stanovení GLP-1 analogů a integrace pokročilých datových analýz pro rychlejší validaci metod.

Závěr

Vyvinutý automatizovaný LC-MS/MS postup pro tirzepatid dosahuje vynikajících parametrů citlivosti, přesnosti a linearity. Metoda umožňuje efektivní šaržové zpracování vzorků a poskytuje spolehlivé údaje pro farmakokinetické studie.

Reference

1. Mounjaro – tirzepatidová injekce. DailyMed. 13. května 2022.
2. Zepbound – tirzepatidová injekce. DailyMed. 9. listopadu 2023.