LC-FLD analysis of 4 PAHs in olive oil samples using AZURA® GPC Cleanup System

Význam tématu

Polycyklické aromatické uhlovodíky (PAHs) patří mezi významné environmentální kontaminanty s prokázanou karcinogenní a mutagenní aktivitou. Jejich přítomnost v potravinách, zejména v olejích, představuje pro spotřebitele zdravotní riziko. Analytické metody umožňující spolehlivou detekci a kvantifikaci PAH4 (součet čtyř klíčových látek) jsou proto v praxi nezbytné pro zabezpečení shody s platnou legislativou.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit účinnost systému AZURA® GPC Cleanup k předúpravě vzorků olivového oleje před HPLC analýzou s fluorescenční detekcí. Výzkum se zaměřil na identifikaci a kvantifikaci benzo(a)pyrenu a celkové koncentrace čtyř PAHs dle požadavků Nařízení (EU) 835/2011.

Použitá metodika a instrumentace

Matrizová extrakce:

• 150 mg vzorku olivového oleje ředěno směsí cyklohexan:DCM (70:30, v/v) do objemu 2 mL
• ultrazvukové promíchání a filtrace 0,45 µm PTFE filtrem

GPC čištění na systému AZURA® GPC Cleanup:

• plnění vzorkových loopů mobilem, následná injekce a automatické frakcionování
• koncentrace vyčištěných frakcí pod dusíkem a rekonstituce do HPLC mobile fáze

HPLC-FLD analýza:

• kolona Nucleosil C18 PAH (150 × 4 mm, 5 µm) s gradientem vody a acetonitrilu
• fluorescenční detektor s optimalizovanými exitačními a emisními vlnovými délkami pro jednotlivé PAHs

Použitá instrumentace

• Systém AZURA GPC Cleanup (pumpa, autosampler, fractionation valve)
• HPLC jednotka AZURA s fluorescence detektorem RF-20A
• Kolony: Bio-Beads S-X3 pro GPC a Nucleosil 100-5 C18 PAH pro HPLC
• Software Mobile Control Chrom a ClarityChrom 7.4.1

Hlavní výsledky a diskuse

• Detekční limity (LOD) pro jednotlivé PAHs byly 0,01–0,04 µg/L, kvantifikační limity (LOQ) 0,04–0,13 µg/L, tedy pod legislativními limity 2 µg/kg (BaP) a 10 µg/kg (PAH4).
• Preciznost metody byla lepší než 5 % (RSD), průměrné recovery 60–100 % dle povoleného rozmezí 50–120 %.
• Ve čtyřech reálných vzorcích olivového oleje nebyl detekován benzo(a)pyren a součet PAH4 se pohyboval mezi 1,3–8,8 µg/kg, čímž splňoval požadavky Nařízení (EU) 835/2011.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a reprodukovatelná předúprava vzorků s vysokou efektivitou odstraňování interferencí
• Vysoká citlivost a selektivita HPLC-FLD analýzy umožňující spolehlivou kontrolu potravinářských olejů
• Metoda je vhodná pro použití v QA/QC laboratořích a pro oficiální kontrolu dle EU předpisů

Budoucí trendy a možnosti využití

V dalším vývoji lze očekávat:

• rozšíření metody na širší spektrum polyaromatických uhlovodíků (PAH8, PAH16)
• integraci s LC-MS/MS pro větší analytickou selektivitu a možnost vícekanálového detekčního režimu
• automatizované řešení čištění a analýzy pro vysokoprostorové provozy

Závěr

Studie prokázala, že kombinace AZURA® GPC Cleanup systému a HPLC-FLD detekce nabízí spolehlivou, citlivou a legislativně vyhovující metodu pro kvantifikaci 4 PAHs v olivových olejích. Všechny testované vzorky vykázaly hladiny pod stanovenými limity, což potvrzuje vhodnost metody pro rutinní kontrolu kvality.

Reference

• [1] Vasudha Bansal, Ki-Hyun Kim. Environment International 84 (2015) 26–38.
• [2] Moon H.B., Kannan K., Lee S.J., Ok G. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 51 (2006) 494–502.
• [3] Commission Regulation (EC) No 1881/2006 of 19 December 2006 setting maximum levels for certain contaminants in foodstuffs.
• [4] Commission Regulation (EU) No 835/2011 of 19 August 2011 amending Regulation (EC) No 1881/2006 regarding maximum levels for PAHs in food.
• [5] Commission Regulation (EU) No 836/2011 of 19 August 2011 laying down methods of sampling and analysis for official control of benzo(a)pyrene in foodstuffs.