Scaling and Migration of a Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography (HILIC) Method for Related Compounds of Ribavirin to Modern HPLC Systems

Význam tématu

Scaling a migrace chromatografických metod mezi UHPLC a HPLC jsou klíčové pro zajištění konzistence analýz různých laboratoří. Umožňuje přenést rychle vyvinuté metody na standardní QC systémy bez ztráty kvality výsledků. Pro farmaceutický průmysl, kde je sledování API a jejich nečistot regulováno, tato schopnost zefektivňuje validaci a dodržování norem.

Cíle a přehled studie

Tato studie demonstruje přizpůsobení HILIC metody pro analýzu ribavirinu a souvisejících sloučenin ze sloupce s částicemi 1,7 µm na sloupce 2,5 a 3,5 µm s odpovídající chemií. Následně byla metoda přenesena z ACQUITY UPLC H-Class PLUS na systémy ACQUITY Arc, Arc HPLC a Alliance iS HPLC, s ověřením ekvivalentního výkonu.

Použitá metodika a instrumentace

Výchozí metoda využívala mobilní fáze acetonitril, vodu a 100 mM uhličitan amonný (pH 10), kolonu HILIC při 30 °C a detekci UV 220 nm. Geometrické škálování parametrů (průtok, objem injekce, gradient) bylo provedeno pomocí Waters Columns Calculator za udržení poměru L/dp. Pro kompenzaci rozdílů dwell objemu byla aplikována funkce Gradient SmartStart v Empower.

• ACQUITY UPLC H-Class PLUS (dwell 0,375 mL)
• ACQUITY Arc (dwell 1,19 mL)
• Arc HPLC (dwell 1,35 mL)
• Alliance iS HPLC (dwell 1,5 mL)
• Empower 3 FR5 SR5 pro sběr a zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny systémy dosáhly srovnatelných chromatogramů s obdobnými časy retence, hodnotami retentivity (k*) a rozlišení (Rs) při L/dp kolem 29 000–30 000. Šestinásobná opakovatelnost retencí a ploch píků vykázala velmi nízké procento RSD (<1 %). Analýza spikovaných vzorků ukázala konzistentní obsah nečistot (% impurity) napříč platformami s obdobnými relativními časy retence.

Přínosy a praktické využití metody

• Umožňuje QC laboratořím bez nízkodisperzních systémů využít rychle vyvinuté metody.
• Waters Columns Calculator zjednodušuje výpočet parametrů pro různé sloupce.
• Gradient SmartStart automaticky upravuje start gradientu při migraci metod.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření automatizovaných nástrojů pro přenos metod mezi instrumenty různých tříd, integrace s laboratorními informačními systémy a aplikace podobných přístupů na jiné farmaceutické účinné látky či složitější vzorky.

Závěr

Metoda HILIC pro ribavirin a související sloučeniny byla úspěšně škálována a migrována mezi UHPLC a HPLC platformami. Zachovaly se chromatografické parametry, opakovatelnost i kvantitativní výsledky, což potvrzuje účinnost přístupu pro praktické použití v QC.

Reference

1. Dong MW. Ultrahigh-Pressure Liquid Chromatography, Part III: Potential Issues. LC–GC North America. 2017.
2. USP 〈1224〉 Transfer of Analytical Procedures. USP 43–NF 38. 2013.
3. Hong H, McConville PR. Dwell Volume and Extra-Column Volume: Impact on Method Transfer. Waters White Paper. 2018.
4. Berthelette KD et al. Fast Analysis of Ribavirin and Related Compounds Using HILIC. Waters Application Note. 2020.
5. MedlinePlus. Ribavirin Drug Information. MedlinePlus. 2024.
6. Waters Columns Calculator. Waters Support. 2024.
7. Waters Corp. Protocol for Gradient Delay Measurement. Waters Applications Notebook. 2013.