Collection of trace blood using dedicated device and simultaneous analysis of immunosuppressive drugs in whole blood samples

Význam tématu

Imunosupresiva jsou klíčová pro prevenci rejekce po transplantaci, avšak jejich terapeutické okno je úzké. Přesná a spolehlivá měření koncentrací v krvi zajišťují optimální dávkování, minimalizují riziko infekcí a dalších komplikací a přispívají k lepší adherenci pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo validovat metodu pro simultánní kvantifikaci šesti imunosupresiv (mykofenolová kyselina MPA, MPAG, takrolimus, everolimus, sirolimus a cyklosporin A) z miniaturních objemů krve odebraných pomocí zařízení Microsampling Wing™. Studie zahrnovala srovnání výsledků z kapilární (prst) a venózní krve a porovnání s hodnotami z lékařských záznamů.

Použitá metodika

Vzorek krve (~2,8 µL) byl odebrán přes Microsampling Wing™, následně vysušen a extrahován centrifugací s přídavkem interních standardů. Kvantifikace probíhala na LC-MS/MS systému pomocí trap a analytické kolony DOSIMMUNE. Pro MPA a MPAG se použila ESI v negativním režimu, pro ostatní analyty ESI pozitivní. Kalibrace byla provedena v rozsahu 0,1–50 mg/L pro MPA, 1–250 mg/L pro MPAG a 1,73–1866 µg/L pro ostatní imunosupresiva. Validace zahrnovala přesnost, opakovatelnost a stanovení mezí detekce.

Použitá instrumentace

• Microsampling Wing™ pro odběr stopové kapilární krve
• LC-MS/MS systém Nexera™ X3 spojený s detektorem LCMS-8050 (Shimadzu)
• Trap a analytické kolony DOSIMMUNE (Shimadzu)
• Centrifugační evaporátor pro přípravu kalibrátorů
• Centrifuga na 15 000 rpm pro extrakci vzorků

Hlavní výsledky a diskuse

• Opakované měření QC vzorků potvrdilo přesnost v rámci referenčních rozmezí u všech analyzovaných sloučenin.
• Korelační koeficienty (R²) kalibračních křivek překročily 0,992, což svědčí o linearitě a spolehlivosti metody.
• Srovnání hodnot z odběru z prstu a venózní krve vykazuje vysokou shodu (R² > 0,94) i vůči lékařským záznamům.
• Metoda nevyžaduje velký objem krve, což zvyšuje komfort pacientů a rozšiřuje možnosti použití mimo klinická pracoviště.

Přínosy a praktické využití metody

• Snížení objemu odebrané krve pod 3 µL usnadňuje monitoring u pediatrických pacientů a v terénu.
• Rychlá příprava vzorků a krátká doba analýzy podporují urgentní terapeutické rozhodnutí.
• Integrovaný přístup zajišťuje simultánní měření šesti klíčových imunosupresiv v jediné analýze.

Budoucí trendy a možnosti využití

Mikrosampling a pokročilá LC-MS/MS analýza směřují k vývoji přenosných diagnostických systémů a vzdáleného monitoringu pacientů. Další rozšíření by mohlo zahrnovat automatizaci přípravy vzorků, rozšíření panelu lékových analyz a integraci s digitálními platformami pro personalizovanou medicínu a telemedicínu.

Závěr

Byla vyvinuta a úspěšně validována citlivá a přesná metoda pro simultánní kvantifikaci imunosupresiv z miniaturních objemů krve. Díky vysoké korelaci s konvenčními odběry a lékařskými záznamy tato metoda nabízí nový standard pro terapeutický monitoring s přidanou hodnotou pro klinickou praxi.

Reference

1. Goda T., Suzuki Y., Masuda J., Kimura N., Aizawa K. Collection of trace blood using dedicated device and simultaneous analysis of immunosuppressive drugs in whole blood samples. Shimadzu Corporation & Jichi Medical University, Japan.