Evaluation of Benchtop Quadrupole Orbitrap Ultra-High-Resolution Mass Spectrometer in Rapid Quantitative Analysis of Immunosuppressant Drugs in Blood Samples

Význam tématu

Analýza imunosupresivních léčiv v krevním vzorku je klíčová pro monitorování terapeutických hladin u transplantovaných pacientů a pro zajištění optimálního léčebného účinku s minimální toxicitou.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyhodnotit výkonnost benchtop hybridního kvadrupol-Orbitrapového spektrometru pro rychlou kvantitativní analýzu cyklosporinu A, everolimu, sirolimu a takrolimu v lidské krvi a porovnat jej se standardní triple-quad metodou.

Použitá metodika

• Příprava vzorku: proteinová precipitace 100 μL krve pomocí 0,1 M ZnSO₄ a methanolického vnitřního standardu.
• Chromatografie: 3minutový gradient s mobilními fázemi A (0,1 % formiát, 10 mM ammonium formiát ve vodě), B (metanol) a C (acetonitril/isopropanol/acetone 45:45:10), kolona Javelin guard 10×2,1 mm, 5 μm, tok 0,5 mL/min, teplota 75 °C.
• Hmotnostní spektrometrie: PRM režim, izolační šířka prekurzoru 1 amu, rozlišení 17 500, HESI ionizace, sledování nejintenzivnějšího fragmentu pro kvantifikaci.
• Hodnocení: stanovení LOQ, intra- a inter-assay přesnosti, robustnosti, matrice a korelace se standardní metodou.

Použitá instrumentace

• HPLC: Thermo Scientific Dionex UltiMate 3000 s autosamplerem OAS-3X00TXRS
• Kolona: Thermo Scientific Javelin guard column, 5 μm, 10×2,1 mm
• MS: Thermo Scientific Q Exactive Focus Orbitrap s HESI
• Software: Thermo Scientific TraceFinder 3.2

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje LOQ v rozmezí 2,3–26,1 ng/mL, intra- i inter-assay RSD <6 %, absolutní obnovy 90–112 %, relativní (IS ratio) 80–98 %. Korelace s triple-quad metodou byla v rámci ±15 % odchylky. HRMS poskytuje čisté chromatogramy s jediným píkem pro každý analyzovaný ligand.

Přínosy a praktické využití metody

Rychlý 3min gradient, nízké náklady na spotřební materiál, vysoká selektivita a robustnost umožňují efektivní využití v klinických výzkumných i QA/QC laboratořích pro terapeutické monitorování.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozšíření na multiplexní vyšetření imunosupresiv a metabolitů, plná automatizace přípravy vzorku, integrace s laboratorními informačními systémy a využití strojového učení pro pokročilou analýzu dat.

Závěr

Vyvinutá LC-HRMS metoda splňuje klinické požadavky, nabízí vysokou citlivost, selektivitu a významně zkracuje dobu analýzy i revize dat ve srovnání s konvenčními triple-quadrupolovými přístroji.

Reference

V textu nebyly uvedeny explicitní literární odkazy.