Gradient Method Transfer of the Iohexol USP Monograph HPLC Method for Related Compounds to Smaller Particle Size ZORBAX Columns

Význam tématu

Modernizace HPLC metod podle monografie USP pro analýzu souvisejících sloučenin u kontrastní látky iohexol umožňuje výrazné zkrácení doby analýzy a snížení spotřeby rozpouštědel. Zkrácení doby měření zvyšuje produktivitu laboratorní práce a přispívá k udržitelnějším postupům včetně nižších provozních nákladů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo převést gradientní USP metodu pro sledování nežádoucích vedlejších produktů iohexolu z konvenčního 5 µm sloupce (4,6 × 250 mm) na moderní Agilent ZORBAX kolony s částicemi o velikosti 3,5 µm (3,0 × 150 mm) a 1,8 µm (2,1 × 100 mm) podle revidovaných pokynů USP <621>. Studie hodnotila udržení system suitability parametrů, nároky na revalidaci a přínos v rychlosti a spotřebě mobilní fáze.

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity II LC pro 5 µm a 3,5 µm sloupce: binární pumpa, multisampler, termostat, DAD (254 nm, 5 Hz–10 Hz).
• Agilent 1290 Infinity II LC pro 1,8 µm sloupec: vysokorychlostní pumpa, multisampler, termostat, DAD (254 nm, 40 Hz).
• Kolony Agilent ZORBAX SB-C18 4,6 × 250 mm, 5 µm; 3,0 × 150 mm, 3,5 µm; RRHD SB-C18 2,1 × 100 mm, 1,8 µm.
• Mobilní fáze: voda a acetonitril HPLC kvality; voda s nízkou organickou kontaminací.

Použitá metodika

Postup převodu metody vycházel z revidovaných pokynů USP <621>, které dovolují změnu délky a průměru sloupce i velikosti částic bez revalidace, je-li poměr L/dp v rozsahu –25 % až +50 %. Pro zachování ekvivalentní chromatografické separace byly upraveny:

• Průtok: přepočten podle poměru vnitřních průměrů a velikosti částic.
• Gradientní program: časové úseky škálovány na objem sloupce.
• Objem vzorku: přepočten analogicky k objemu sloupce.

Hlavní výsledky a diskuse

• Doba analýzy se zkrátila z 60 min na 25 min s 3,5 µm sloupcem (−58 %) a na 8,6 min s 1,8 µm sloupcem (−86 %).
• Spotřeba mobilní fáze klesla o 75 % u 3,5 µm sloupce a o 92 % u 1,8 µm sloupce.
• System suitability: rozlišení hlavních izomerů (Rs ≥ 40) a výkon sloupců (L/dp v rozsahu 42 875–55 555) splnilo limity monografie.
• Při změnách nebyla vyžadována revalidace metodiky.

Přínosy a praktické využití metody

Optimalizovaná metoda výrazně zrychluje rutinní kontrolu kvality iohexolu ve farmaceutické výrobě. Nižší spotřeba organických rozpouštědel přináší ekonomické i ekologické výhody. Postup je snadno přenositelný mezi laboratořemi a LC instrumenty Agilent.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace revidovaných zásad USP <621> na další gradientní metody. Další směřování zahrnuje užití ultravysokotlakých LC systémů, ďalší miniaturizaci kolonečních parametrů a integraci s metodami hmotnostní spektrometrie pro zvýšení selektivity.

Závěr

Převedení gradientní USP monografie pro analýzu nežádoucích sloučenin iohexolu na menší částice Agilent ZORBAX SB-C18 kolony prokázalo významné zkrácení doby analýzy a snížení spotřeby rozpouštědla bez nutnosti revalidace. Metoda splňuje všechny požadavky system suitability a zvyšuje efektivitu i udržitelnost laboratorních postupů.

Reference

1. USP Harmonized Standards Home Page. Supplement USP Stage 4 Harmonization, Official, December 1, 2022.
2. USP 35 Monographs. Iohexol, United States Pharmacopeia: 3534–3536.
3. Long, W. J. A Simple Conversion of the USP Assay Method for Diphenhydramine HCl to the Agilent InfinityLab Poroshell 120 Column EC-C8. Agilent Technologies application note 5994-5400EN, 2022.