Fast separation of coccidiostats

Význam tématu

Coccidiostatika jsou klíčovými látkami využívanými v chovech drůbeže pro prevenci parazitárních onemocnění. S narůstající kontrolou jejich použití vzrůstá potřeba citlivých a rychlých analytických metod, které umožní efektivní monitorování zbytků těchto látek v krmivu i v biologických vzorcích.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem této aplikace bylo ukázat, jak lze pomocí moderní UHPLC instrumentace a sloupce s pevnou jádrovou částicí zkrátit dobu analýzy coccidiostatik pod pět minut, přičemž se dosáhne tří- až pětinásobného zvýšení kapacity vzorků a snížení nákladů na spotřebu mobilní fáze.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly připraveny rozpuštěním standardů coccidiostatik v roztoku voda/acetonitril. Pracovní koncentrace činila 0,1 mg/mL.

• UHPLC systém: Thermo Scientific Vanquish Flex Quaternary UHPLC
• Sloupec: Accucore Phenyl-Hexyl 100 × 2,1 mm, 2,6 µm (pevné jádro)
• Pumpa: Quaternary Pump F
• Detekce: Diode Array Detector (DAD), 268 nm, LightPipe flow cell 10 mm
• Teplota kolony: 50 °C, still air s předhřevem eluentu
• Mobilní fáze A: voda/methanol 95:5 (v/v), B: voda/methanol 5:95 (v/v)
• Gradient: 0–1,47 min 15→85 % B, 1,48 min návrat na 15 % B, equilibrace do 4,70 min
• Průtok: 0,6 mL/min; objem injekce: 1 µL

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace teploty (40–60 °C) potvrdila zkrácení retenčních časů a zúžení šířky píků bez změny selektivity. Vybrána byla 50 °C spolu s průtokem 0,6 mL/min. Vzorky čtyř coccidiostatik se plně oddělily do 2,5 min s vynikajícími hodnotami RSD retenčních časů pod 0,08 % (n = 24). Kompletní analytický cyklus, včetně equilibrace, trval méně než 5 min.

Přínosy a praktické využití metody

• Trojnásobné zvýšení kapacity analýzy vzorků oproti konvenčním HPLC metodám (z 15 min na ~5 min)
• Pětinásobné snížení spotřeby mobilní fáze a produkce odpadu
• Výborná opakovatelnost a robustnost díky stabilním vlastnostem pevného jádra sloupců
• Rychlá dostupnost výsledků pro QA/QC laboratoře i veterinární kontrolu

Budoucí trendy a možnosti využití

Solid core HPLC sloupce se jeví jako perspektivní nástroj pro zrychlené metody v širokém spektru malých molekul. Další rozvoj lze očekávat v automatizaci přípravy vzorků, integraci UHPLC Speed-Up nástrojů v softwaru a rozšíření aplikace pro další skupiny veterinárních léčiv.

Závěr

Popsaná UHPLC metoda s Accucore Phenyl-Hexyl sloupcem umožňuje rychlou a spolehlivou analýzu coccidiostatik s podstatně vyšší průchodností, nižšími provozními náklady a vynikající reprodukovatelností. Tento přístup usnadňuje rutinní monitorování a zajišťuje efektivní kontrolu residuí v krmivech i biologických vzorcích.

Reference

1. FVE position paper on coccidiostats or anticoccidials, FVE, 2004.
2. Improved analysis of veterinary drug coccidiostats using a Thermo Scientific Hypersil GOLD Phenyl HPLC column, AN 509, Thermo Fisher Scientific.
3. Accucore HPLC Columns Technical Guide, Thermo Fisher Scientific, TG-20666.