Simplified, high-throughput separation of glucocorticoids

Význam tématu

Glukokortikoidy představují klíčovou skupinu hormonů s významným uplatněním v lékařském a farmaceutickém výzkumu. Jejich strukturní podobnost však komplikuje chromatografickou separaci. Efektivní, vysoce propustné metody s minimalizovanou spotřebou mobilní fáze jsou proto zásadní pro vývoj a rutinní QA/QC analýzy.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo demonstrovat, že použití alternativní selektivity stacionární fáze (pokročilá technologie Accucore C30) umožňuje zjednodušit a významně urychlit separaci sedmi strukturně podobných glukokortikoidů (prednisone, cortisone, prednisolone, hydrocortisone, corticosterone, betamethasone, dexamethasone) pomocí dvouminutové izokratické metody.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Thermo Scientific Vanquish Flex Quaternary se SmartInject technologií
• Quaternary Pump F, Split Sampler FT, Column Compartment H, Active Pre-heater
• Diode Array Detector HL s Thermo Scientific LightPipe Flow Cell, 10 mm
• Thermo Scientific Virtuoso Vial Identification System
• Software Chromeleon 7.2 SR4
• Kolona Accucore C30, 150 × 2,1 mm, 2,6 µm

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda využívá izokratickou směs 73 % vody, 8 % methanolu a 19 % tetrahydrofuran (THF) při průtoku 0,6 mL/min a teplotě kolony 60 °C. Díky pevně jádrové struktuře částic kolony dochází k vynikající účinnosti i při vysoké lineární rychlosti. Sedm komponent bylo rozděleno do dvou minut s hodnotou rozlišení kritické dvojice nad 1,5, přičemž relativní účinnost při průtoku 0,6 mL/min dosahovala 80 % optimální rychlosti. Dvacet čtyři opakovaných injekcí prokázalo extrémní opakovatelnost s RSD retenčních časů pod 0,14 % (0,1–0,14 %).

Přínosy a praktické využití metody

• Dvěminutová izokratická analýza s jednoduchou přípravou mobilní fáze
• 10× vyšší propustnost vzorků oproti tradičním metodám (20 min, 1,2 mL/min)
• 20× snížení spotřeby mobilní fáze a produkce odpadu
• Nízké provozní náklady díky redukovanému objemu organických rozpouštědel
• Vhodné pro rutinní QA/QC v farmaceutickém průmyslu

Budoucí trendy a možnosti využití

Potenciál metody spočívá ve využití pro širší škálu steroidů a malých molekul s podobnou selektivitou C30 fází. Dalšími směry jsou integrace s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity, automatizace vzorkování a rozvoj ekologičtějších metod minimalizujících používání THF. Vyvíjejí se rovněž ultra-rychlé kolony s menšími částicemi pro další zkrácení analýzy.

Závěr

Ukázaná izokratická metoda na Accucore C30 kolonce na Vanquish Flex systému nabízí rychlou, reprodukovatelnou a nákladově efektivní separaci sedmi glukokortikoidů do dvou minut. Tím významně zvyšuje propustnost analýz a snižuje spotřebu organických rozpouštědel, což je klíčové pro moderní farmaceutickou analytiku.

Reference

• Rapid analysis of nine corticosteroids using a Thermo Scientific Acclaim RSLC C18 column. Application Note, Thermo Fisher Scientific.
• Accucore HPLC Columns Technical Guide. Thermo Fisher Scientific.