Direct Quantitation of Phosphatidylethanol (PEth) in Volume-Controlled Dried Blood Spots using the Fully Automated Transcend DSX-1 System

Význam tématu

Quantifikace phosphatidylethano­lů (PEth) v zasušovaných vzorcích krve představuje spolehlivý způsob sledování střednědobé konzumace alkoholu. PEth 16:0/18:1 jako nejběžnější homolog vázaný na etanol vykazuje dostatečně dlouhý poločas rozpadu a po zasušení DBS karet zůstává stabilní, což eliminuje riziko enzymatické degradace. Díky malé požadované objemové náplni a minimalizaci invazivity představují DBS vzorky atraktivní možnost pro forenzní, klinickou i průmyslovou aplikaci.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo ukázat plně automatizovaný pracovní postup pro extrakci a kvantifikaci PEth 16:0/18:1 v objemově řízených zasušených krevních bodech využívající systém Thermo Scientific Transcend DSX-1. Auto­matizace zahrnuje modul pro práci se zasušenou matricí, on-line SPE čištění s TurboFlow technologií, automatické přidání vnitřního standardu (AISA) a chromatograficko-hmotnostní analýzu v jediném bezobslužném cyklu.

Použitá metodika

Objemově řízený vzorek 10 μL lidské krve byl nanesen na DBS kartu pomocí přístroje HemaXis DB10. Po vysušení proběhla automatická extrakce reaktivní kapalinou při vyhřátí (HotCap 100 °C) a odtok analyzátů přes modul Flow-Through Desorption (FTD). Následovalo on-line SPE čištění na TurboFlow sloupci v režimu Focus a gradientní UHPLC separace na analytickém C8 sloupci. Kvantifikace probíhala na triple kvadrupólu se SRM v negativním ESI módu.

Použitá instrumentace

• Transcend DSX-1 dried matrix spot module
• Thermo Scientific TurboFlow technology
• Thermo Scientific Vanquish UHPLC system
• Thermo Scientific TSQ Altis Plus mass spectrometer
• HemaXis DB10 volume-controlled blood collection device
• Intelligent Vision Camera (IVC) a modul AISA

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla lineární kvantifikace PEth 16:0/18:1 v rozsahu 20 až 2000 ng/mL s koeficientem determinace R2 vyšším než 0,99 a relativní odchylkou do 10 %. Vzorky QC na hladinách 50 a 200 ng/mL vykazovaly přesnost v limitu 100 ± 10 % a denní i mezidenní RSD pod 10 %. Automatizovaná metoda poskytla 8minutový analytický běh s kapacitou zpracování až 96 DBS karet bez zásahu operátora. Minimalizované prostupy mezi vzorky zajišťovala kombinace C8 sloupce, rychlého mytí a kontrolované hydrofobity PEth.

Přínosy a praktické využití metody

Plně automatizované řešení zkracuje čas přípravy a analýzy, zvyšuje reprodukovatelnost výsledků a snižuje riziko kontaminace či chyb obsluhy. Metoda je vhodná pro klinické laboratoře, forenzní toxikologii, screening zaměstnanců i pacientů a rutinní kontrolu konzumace alkoholu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření on-line workflow na další alkohol-spécifické biomarkery a kombinované analýzy lipidů. Dále je možné integrovat pokročilé AI-řízené rozpoznávání vzorku, miniaturizaci systémů pro terénní použití a propojení s elektronickými laboratorními informačními systémy pro bezpapírový provoz.

Závěr

Systém Transcend DSX-1 v kombinaci s TurboFlow a UHPLC-MS/MS nabízí robustní, rychlý a vysoce citlivý přístup ke kvantifikaci PEth 16:0/18:1 v zasušených krevních bodech. Plná automatizace zjednodušuje workflow, zvyšuje propustnost a poskytuje kvalitní data pro forenzní i klinické aplikace.

Reference

1. Javors M A et al Alcohol Clin Exp Res 2016 Jun 40 6 1228-1234
2. Viel G et al Int J Mol Sci 2012 Nov 13 11 14788-14812