Analysis of Danshen (Salvia Miltrorrhiza) and Compound Danshen Dropping Pills using Poroshell 120 Superficially Porous LC Columns

Význam tématu

Danshen (Salvia miltiorrhizae) a jeho přípravky představují složité matrice tradiční čínské medicíny využívané zejména pro kardiovaskulární onemocnění. Pro zajištění konzistentní kvality a bezpečnosti je nutné získat reprezentativní chromatografický „otisk“ celého spektra bioaktivních složek.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a ověřit HPLC metodu založenou na Agilent Poroshell 120 superficially porous sloupcích pro identifikaci a separaci osmi klíčových sloučenin v extraktu z Danshen a v Compound Danshen Dropping Pills. Metoda byla porovnána s UPLC analýzou na Waters HSS T3 kolóně a testována na standardních HPLC přístrojích.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly připraveny dvěma postupy: rozpuštění tablet v deionizované vodě a vodní extrakcí sušeného mletého kořene při 80 °C. Analýza probíhala gradientní elucí 0,02 % H3PO4 (fáze A) a směsí ACN/voda s 0,02 % H3PO4 (fáze B).

• Agilent 1200 Series RRLC: G1312B Binary Pump SL, G1376C ALS, G1316B TCC, G1316C DAD
• Agilent Poroshell 120 EC-C18 a SB-C18 sloupce (2,7 µm, 3,0 × 100 mm a 4,6 × 100 mm)
• Agilent ZORBAX RRHT Eclipse Plus C18 (1,8 µm, 4,6 × 100 mm) a Waters HSS T3 (1,8 µm, 2,1 × 100 mm) pro srovnávací měření

Hlavní výsledky a diskuse

Poroshell 120 EC-C18 poskytl o něco vyšší retenci a lepší selektivitu než SB-C18, odlišil malé nečistoty v blízkosti hlavních píků. Ve srovnání s Waters HSS T3 byla analýza rychlejší, s ostřejšími píky a nižším vrcholovým tlumením (Tf1 až 1,13 vs 1,21) při max. tlaku 287 bar oproti 503 bar u UPLC kolony. Zkoušky vyšších průtoků ukázaly zachování rozlišení i při průtoku až 1,0 ml/min s tlaky pod 400 bar. Vodní extrakty na Poroshell 120 prokázaly lepší rozlišení díky rychlejšímu přenosu hmoty v povrchově porézích částicích.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje komplexní fingerprinting TCM přípravků na běžných HPLC přístrojích s maximálním provozním tlakem 400 bar. Redukce tlaku o 40–50 % usnadňuje nasazení v rutinních laboratořích bez nutnosti UHPLC technologického vybavení.

Budoucí trendy a možnosti využití

Poroshell superficially porous sloupce lze aplikovat na širší spektrum přírodních extraktů a biomarkerů. Očekává se další integrace s hmotnostní spektrometrií pro zlepšení selektivity a citlivosti a optimalizace gradientů a průtoků pro zkrácení analýzy.

Závěr

Agilent Poroshell 120 superficially porous kolony nabízejí vysokou účinnost separace a výrazně nižší zpětný tlak, což z nich činí univerzální řešení pro kvalitativní a kvantitativní analýzu složitých TCM systémů na standardní HPLC technice.

Reference

• MedlinePlus. Danshen. U.S. National Library of Medicine.
• Compound Danshen Dropping Pills. China Pharmacopoeia 2010, s. 906.