SOHT: ANALYSIS OF CARBOXY-THC USING UPLC-MS/MS

Význam tématu

Využití vlasů jako biologické matrice pro toxikologickou analýzu nabízí několik zásadních výhod: neinvazivní odběr, dlouhá detekční okna (měsíce až roky) a snadná manipulace a skladování vzorků. V souvislosti s nejběžnějším nelegálním drogou – konopím – je klíčové spolehlivě kvantifikovat metabolit 11-nor-9-carboxy-Δ9-tetrahydrocannabinolu (cTHC) v nízkých koncentracích, aby byly splněny potvrzovací limity stanovené Society of Hair Testing (SoHT).

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem studie bylo stanovit a validovat citlivou, robustní metodu UPLC-MS/MS pro kvantifikaci cTHC ve vlasových vzorcích v rozsahu sub pg/mg tak, aby byla zajištěna přesná a reprodukovatelná detekce na úrovni doporučených cut-off hodnot SoHT (0,2 pg/mg).

Použitá metodika a instrumentace

Analytická metoda zahrnovala následující kroky:

• Odběr a příprava vzorků: 25 mg předem dekontaminovaných vlasů, nasypaných do uzavíratelné centrifugační zkumavky.
• Přidání interního standardu (cTHC-d3) a reaktantu M3, inkubace 60 min při 100 °C.
• Extrakce pomocí SPE Cartridge OASIS PRiME HLB (30 mg): oplach acetonitrilem a hexanem, eluát acetonitril/methanol (9:1), následné odpaření a rekonstituce v 100 µl 50 % methanol-amoniakálního roztoku.
• Chromatografie: UPLC I-Class FTN systém s injekční jehlou 30 µl (nebo 15 µl + 50 µl loop), kolona ACQUITY Premier BEH C18 (1,7 µm, 2,1×150 mm) při 55 °C, mobilní fáze A (0,4 mM fluorid amonný + 0,0025 % hydroxid amonný), mobilní fáze B – methanol, průtok 0,35 ml/min, gradient dle tabulky.
• Detekce MS/MS: ESI v negativním režimu, kapilární napětí 2,5 kV, teplota desolvace 600 °C, tok desolvačního plynu 1000 l/h, zdrojová teplota 150 °C, MRM přechody cTHC (434,1→191,0 kvantifikátor; 434,1→245,1 kvalifikátor) a cTHC-d3 (346,1→248,1).

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala:

• Lineární rozsah 0,2–10 pg/mg s vynikajícím korelačním koeficientem a stabilními rezidui kalibrační křivky.
• Limit detekce a kvantifikace adekvátní pro cut-off 0,2 pg/mg: signál-šum pro kvantifikátor i kvalifikátor překračoval požadované hodnoty.
• Výbornou opakovatelnost: pěti různé vlasové vzorky analyzovány ve trojitém opakování vykázaly nízkou rozptylovou odchylku.
• Žádné carry-over: injekce vzorku 5 pg/mg následovaná blankem neprokázala detekovatelné zbytky analytu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje forenzním laboratořím spolehlivě prokazovat expozici konopí, odlišovat pozitivitu způsobenou pasivním vs. aktivním užitím a dodržovat standardy SoHT. Jednoduchý odběr vlasů bez nutnosti zdravotnického personálu výrazně usnadňuje dohled nad kolekcí vzorků a minimalizuje riziko manipulace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metodiky na multiplexní analýzy dalších drog ve vlasech, integrace s automatizovanými SPE systémy a vývoj modulů pro rychlé screenování. Dále lze uvažovat o aplikaci podobného přístupu na neinvazivní matrici nehet nebo plazmu pro špičkové forenzní a klinické účely.

Závěr

Popsaná UPLC-MS/MS metoda pro kvantifikaci cTHC ve vlasech dosahuje sub pg/mg citlivosti, splňuje přísné požadavky SoHT na potvrzovací označení a prokazuje vysokou robustnost a reprodukovatelnost. Tím poskytuje vhodný nástroj pro forenzní toxikologii s možností jednoduché implementace v rutinních laboratořích.

Reference

1. G.A.A. Cooper, R. Kronstrand, P. Kintz. Society of Hair Testing guidelines for drug testing in hair. Forensic Science International 281 (2012) 20–24.