Measuring Bile Acid Levels in Human Plasma Using a Triple Quadrupole Mass Spectrometer

Význam tématu

Žlučové kyseliny jsou nezbytné pro emulgaci tuků ve střevě a ovlivňují přeměnu cholesterolu v játrech. Detailní stanovení jednotlivých zlú_2čových kyselin v plasmě umožňuje citlivou detekci jaterních dysfunkcí a dalších metabolických poruch.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout a ověřit kvantitativní LC-MS/MS metodu pro simultánní měření 22 žlučových kyselin v lidské plasmě s využitím vnitřních standardů. Studie demonstrovala dlouhodobou stabilitu analýzy bez nutnosti opakovaného ladění přístroje.

Použitá instrumentace

• Kapalinový chromatograf Nexera X2 (Shimadzu)
• Reverzní fázová analytická kolona
• Hmotnostní spektrometr LCMS-8060 s triple kvadrupólem
• Ionizace ESI v negativním režimu

Metodika

Vzorek: 50 µl lidské plazmy extrahované 350 µl methanolového roztoku s devíti deuterovanými vnitřními standardy. Postup:

1. Krátké promíchání a inkubace na ledu
2. Centrifugace (16 000 g, 5 min, 4 °C) a koncentrování supernatantu
3. Lyofilizace přes noc a rozpuštění v 200 µl methanolu
4. Ultrazvuková extrakce a druhá centrifugace
5. Analýza 2 µl injekce metodou gradientní eluce

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda úspěšně separovala a kvantifikovala 22 žlučových kyselin. V QC vzorcích (n=34) měly 21 sloučenin %RSD hodnoty mezi 2,8 a 12,4, výjimkou byla kyselina GHDCA (%RSD 49,9). Při 19denním nepřetržitém měření 272 klinických vzorků bez ladění přístroje zůstaly internal standards stabilní s %RSD 4,9–6,0. Výsledky potvrzují vysokou reprodukovatelnost a robustnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

• Komplexní profilování žlučových kyselin v klinických studiích
• Prognostika a diagnostika jaterních onemocnění
• Využití v preklinickém výzkumu a farmakokinetice léčiv ovlivňujících metabolismus tuků

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metod pro detekci nových konjugovaných a modifikovaných žlučových kyselin. Integrace s metabolomickými platformami a automatizovaná příprava vzorků mohou dále zrychlit analýzy a zvýšit jejich dostupnost v klinické praxi.

Závěr

Popsaná LC-MS/MS metoda na přístroji LCMS-8060 nabízí spolehlivou a citlivou analýzu 22 žlučových kyselin v lidské plasmě s vynikající reprodukovatelností během dlouhodobých měření. Díky robustnosti bez nutnosti opakovaného ladění je vhodná pro rutinní laboratorní aplikace.

Reference

• Nakanishi T. a kol.: Effect of a High-Fat Diet on the Small-Intestinal Environment and Mucosal Integrity in the Gut-Liver Axis, Cells 2021, 10(11), 3168.