Fast Profiling of 39 Bile Acids in Plasma, Urine and Feces, by Automated Extraction and LC-MS/MS

Význam tématu

Žlučové kyseliny jsou základními metabolity klíčovými pro cholesterolový metabolismus a vstřebávání tuků. Jejich profilování v různých biologických matricích přispívá k diagnostice jaterních onemocnění a pochopení regulačních mechanismů organismu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout rychlou, plně automatizovanou metodu pro kvantifikaci 39 primárních, sekundárních a konjugovaných žlučových kyselin v plazmě, moči a stolici. Studie kombinuje efektivní extrakci vzorků s 10minutovým LC-MS/MS měřením.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy (250 µL), moči a stolice (5–10 mg) byly připraveny pomocí Biotage Extrahera™ v 96jamkové formě. Pro stolici byla aplikována alkalická hydrolýza (KOH, 20 min, 80 °C). Postup zahrnoval sekvenční mytí polyester-metanolovým roztokem, eluci a přenos do eluce-plate.
Analytická fáze proběhla na UHPLC Nexera™ X2 se sloupcem ACE Excel C18 Amide (10 min běh, 0,65 mL/min, teplota 45 °C), spojeném s triple-quadrupólovým LCMS-8060NX™ v módu MRM (ESI negative).

Hlavní výsledky a diskuse

• Kalibrace na 7 bodech (0,5–50 ng/mL) dosáhla koeficientu R² > 0,98.
• Přesnost kvantifikace byla 81–120 % v plazmě, 84–118 % v moči a 90–113 % ve stolici.
• Intra-day RSD retenčních časů < 0,5 % a ploch < 12 %; inter-day RSD < 0,3 % a < 15 %.
• Obě strategie kvantifikace (interní kalibrace i přímé izotopické ředění) prokázaly vysokou shodu se standardní adicí.

Přínosy a praktické využití metody

• Propustnost 96 vzorků za 45 min (0,5 min na vzorek) – čtyřikrát rychlejší než manuální extrakce.
• Vyšší reproducibilita a nižší náklady pro uživatele.
• Vhodné pro klinický výzkum, diagnostiku i rutinní QA/QC v průmyslové analytice.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu o méně běžné konjugáty a isomery žlučových kyselin.
• Integrace s metabolomickými platformami a objevování nových biomarkerů.
• Vyšší využití v personalizované medicíně pro sledování terapie jaterních onemocnění.

Závěr

Popsaná metoda nabízí rychlou, validovanou kvantifikaci 39 žlučových kyselin ve třech biologických matricích s vynikající přesností a opakovatelností. Je připravena pro rutinní nasazení v klinických i výzkumných laboratořích.

Reference

• Jaffuel A., Kunisawa A., Watanabe J. Fast Profiling of 39 Bile Acids in Plasma, Urine and Feces by Automated Extraction and LC-MS/MS. Shimadzu Corporation, MS Business Unit, Kyoto, Japan.