Separation of Water-Soluble Vitamins on the Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 Column

Význam tématu

Vodou rozpustné vitaminy hrají klíčovou roli v biologických procesech a jejich přesná kvantifikace je nezbytná v potravinářství, farmaceutickém průmyslu i klinické diagnostice. Polarita těchto sloučenin však představuje výzvu pro konvenční C18 kolonky, které při vysokém obsahu vody trpí ztrátou retence a deformací píků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo ověřit schopnost nové kolony Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 (4.6×100 mm, 2.7 µm) dosáhnout efektivního rozlišení 10 vitaminů řady B, kyseliny L-askorbové a kofeinu za pomoci gradientu fosfátového pufru a acetonitrilu. Studie hodnotila rozlišení látek, tvar píků, retenci i reprodukovatelnost analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

Instrumentace:

• Agilent 1290 Infinity LC s binárním čerpadlem G4220A
• Agilent 1290 Infinity autosampler G4226A
• Agilent 1290 Infinity termostatovaná kolona G1316C
• Agilent 1290 Infinity DAD detektor G4212A

Metodika:

• Kolona: Poroshell 120 Aq-C18, 4.6×100 mm, 2.7 µm
• Mobilní fáze A: 10 mM NaH2PO4, pH 2.5
• Mobilní fáze B: acetonitril
• Gradient: 0–2 min 0–6 % B; 2–6 min až 25 % B; 6–8 min až 70 % B; 8–10 min 70 % B; stop 10 min, 2 min postrun
• Průtok: 1.5 mL/min, teplota kolony: 30 °C, injekční objem: 1 µL
• Detekce: UV 260 nm a 210 nm
• Příprava standardů: 12 sloučenin v H2O nebo 5 mM NaOH

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny analyzované sloučeniny byly baseline separovány se symetrickým tvarem píků. Kolona prokázala dostatečnou retenci pro silně polární látky thiamin a kyselinu askorbovou i při 100 % vodném pufru, aniž by došlo k dewetting fenoménu. Promítání výsledků na vlnové délky 260 nm a 210 nm zajistilo detekci látek s různou absorpcí. Reprodukovatelnost byla potvrzena šesti po sobě jdoucími injekcemi s minimální variabilitou retence a ploch píků.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou a spolehlivou analýzu vodou rozpustných vitaminů v laboratorním i průmyslovém prostředí. Jednorázová chromatografie všech vitamínů zjednodušuje pracovní postupy v QA/QC, klinických i výzkumných laboratořích, přičemž minimalizuje spotřebu organických rozpouštědel.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření použití Aq-C18 kolon v kombinaci s hmotnostní spektrometrií, rozvoj metod pro další polární živiny a využití miniaturizovaných systémů pro vysokoprůtokové stanice. Důležitá je též optimalizace zelených chromatografických metod a integrace chemometrických postupů pro automatizaci vyhodnocení.

Závěr

Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 prokázal vynikající výkon při separaci 12 vodou rozpustných sloučenin. Metoda nabízí vysoké rozlišení, stabilní retenci, kvalitní tvar píků a reprodukovatelnost i za 100 % vodných podmínek.

Reference

• Fu R.-J.; Wei T.-C. Analysis of Polar Compounds Using an Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 Column with Improved and Reliable Performance, Agilent Technologies application note, publication number 5994-5555EN, 2022.