LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/Orbitrap
ZaměřeníPotraviny a zemědělství, Metabolomika
VýrobceThermo Fisher Scientific
Význam tématu
Znalost metabolického profilu rostlinných produktů, jako je čaj, je klíčová pro pochopení jejich zdravotních účinků a kvality. Real-time library search v kombinaci s vysoce kvalitními HRAM MSn spektrálními knihovnami umožňuje rychlou a přesnou identifikaci flavonoidů a usnadňuje interpretaci netargetovaných metabolomických dat.
Cíle a přehled studie
Cílem studie bylo vytvořit a ověřit workflow pro hloubkovou analýzu flavonoidů v čajových extraktech za použití HRAM MSn knihovny a RTLS. Hlavní fáze zahrnovaly:
- Vytvoření spektrální knihovny z 40 autentických flavonoidových standardů.
- Optimalizaci LC-MS metody na systému Vanquish Horizon UHPLC a Orbitrap IQ-X Tribrid.
- Implementaci inteligentního akvizičního režimu AcquireX a RTLS pro směřování MSn dat.
- Analýzu zeleného, černého a bylinného čaje s následnou anotací flavonoidů.
Použitá metodika a instrumentace
Separační technika: Vanquish Horizon UHPLC s kolonkou Accucore C18+ (2,1×150 mm, 1,5 µm), gradient 0,1 % FA ve vodě/methanolu, 200 µL/min, 55 °C.
Spektrometrie: Orbitrap IQ-X Tribrid MS s akvizičními režimy:
- AcquireX Deep Scan pro iterativní vytváření vylučovacího a inkluzního seznamu.
- RTLS (Met-IQ) pro real-time porovnávání MS/MS spekter s knihovnou mzVault.
- Fragmentace metodami HCD, CID a UVPD pro sběr MS2–MS5 dat.
Hlavní výsledky a diskuse
Implementace RTLS vedla ke zvýšení počtu vyvolaných MS3 spekter z 416 na 591. Díky workflowu bylo v čajových extraktech identifikováno téměř 100 dalších putativních flavonoidů oproti klasickému přístupu bez RTLS. Kombinace AcquireX a real-time knihovny zlepšila hloubku metabolomického pokrytí a spolehlivost anotací.
Přínosy a praktické využití metody
- Zvýšení přesnosti a rychlosti identifikace flavonoidů v komplexních matricích.
- Vhodné pro výzkum kvality a zdravotních účinků čajových produktů.
- Uplatnění v QA/QC laboratořích při validaci a monitoringu bioaktivních látek.
Budoucí trendy a možnosti využití
- Rozšíření knihoven o další třídy metabolitů (alkaloidy, fenolické kyseliny).
- Integrace strojového učení pro automatizaci interpretace MSn dat.
- Využití workflow v klinické metabolomice a nutrigenomice pro studium vlivu potravin na lidské zdraví.
Závěr
Popisované workflow využívající HRAM MSn spektrální knihovny a RTLS představuje efektivní strategii pro hlubokou a spolehlivou anotaci flavonoidů v čaji. Implementace inteligentního akvizičního režimu zvýšila počet detekovaných putativních flavonoidů a jejich strukturální charakterizaci, což přispívá k rozvoji netargetované metabolomiky.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
