Determination of Gestodene in Human Plasma by SLE-LC-MS/MS Using a Solid Core HPLC Column

Význam tématu

Gestodene je syntetický progesteronový derivát široce využívaný v kombinovaných perorálních kontraceptivních přípravcích. Precizní a citlivé stanovení této látky v lidské plazmě je klíčové pro farmakokinetické studie, bioekvivalenční testy a kontrolu kvality. Metody umožňující rychlou a spolehlivou analýzu s minimálními matricovými interferencemi přispívají ke zlepšení efektivity laboratoří i snížení nákladů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a validovat postup pro stanovení gestodenu v lidské plazmě pomocí extrakce na podpořeném kapalina–kapalina systému (HyperSep SLE) a kapalinové chromatografie s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS). Klíčovým prvkem byl HPLC sloupec s pevnými jádry Accucore C18 a deuterovaný interní standard d6-gestodene.

Použitá instrumentace

• Extrakční kartuše: Thermo Scientific HyperSep SLE 500 mg/3 mL
• HPLC systém: Thermo Scientific Accela 1250 pumpa a Open Autosampler
• Chromatografická kolona: Accucore C18 2.6 µm, 50×2.1 mm
• MS detektor: Thermo Scientific TSQ Vantage, ionizace HESI-II, detekce v SRM režimu
• Pipety Thermo Scientific FinnPipette a mikroinserty Thermo Scientific 300 µL

Použitá metodika

• Příprava standardů: gestodene 0.2 mg/mL a d6-gestodene 0.1 mg/mL v MeOH, následné ředění v MeOH/voda (80:20 v/v).
• Vzorky: 285 µL plazmy, 15 µL standardu, 20 µL interního standardu, 300 µL 0.1 % kyseliny mravenčí.
• SLE extrakce: adsorpce na kartuši 5 min, eluce 2×1 mL methyltert-butyletheru, odpaření dusíkem, rekonstituce v MeOH/voda (80:20, 200 µL).
• LC podmínky: mobilní fáze A = voda + 0.1 % FA, B = methanol + 0.1 % FA; gradient 5→60 % B (0–1 min), 60 % (1–3 min), 95 % (3.2–3.8 min), průtok 0.4 mL/min, teplota 40 °C, injekce 10 µL, doba běhu 5 min.
• MS podmínky: pozitivní HESI, SRM přechody m/z 311.2→109.1 pro gestodene a 317.2→114.1 pro d6-gestodene, CE 25–27 V, vaporizer 400 °C, kapilára 375 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

• Retenční čas gestodenu: 2.84 min.
• Lineární rozsah 0.05–5 ng/mL, korelační koeficient r2 = 0.999, relativní chyby v rozmezí −3.6 % až +4.8 %.
• Přesnost (2.5 ng/mL): %CV = 1.86 %.
• LLOQ 0.05 ng/mL s vysokým poměrem signál/šum.
• Čisté extrakty bez výrazných matricových interferencí díky SLE.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza s celkovým během 5 min umožňuje vysokou propustnost vzorků.
• Snížená spotřeba organických rozpouštědel a eliminace emulgací.
• Jednoduchost a možnost automatizace extrakce zvyšuje reprodukovatelnost.
• Vhodné pro rutinní bioanalytické a klinické farmakokinetické aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozvoj automatizovaných vysokopropustných platforem.
• Přechod k sub-2 µm částicím a UHPLC sloupcům pro zkrácení analýz.
• Rozšíření aplikace na další steroidní hormony a jejich metabolity.
• Integrace s HRMS pro širší screenování biologických vzorků.

Závěr

Vyvinutá SLE-LC-MS/MS metoda na bázi HyperSep SLE a Accucore C18 pevná jádra poskytuje rychlé, citlivé a přesné stanovení gestodenu v lidské plazmě. Vysoká linearita, přesnost a minimální matricové interferenční efekty dovolují její rutinní nasazení ve farmakokinetických a bioekvivalenčních studiích.

Reference

1. Junior E.A.; Duarte L.F.; Pirasol Vanunci M.L.; Teixeira M.L. Bioequivalence of Two Oral Contraceptive Drugs Containing Ethinylestradiol and Gestodene in Healthy Female Volunteers. J Bioequiv Availab 2010, 2, 125–130.
2. FDA Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation, 2012.