Capecitabine in Human Plasma Using SOLA and Accucore Core Enhanced Technology HPLC Column

Význam tématu

Capecitabine je perorální prodrug 5-fluorouracilu široce používaný v onkologii. Jeho rychlé a spolehlivé stanovení v lidské plazmě je nezbytné pro monitorování expozice pacientů, farmakokinetické studie a optimalizaci léčby.

Cíle a přehled studie

• Vyvinout jednoduchou a rychlou metodu pro analýzu capecitabinu v nízkých objemech lidské plazmy (100 µL).
• Optimalizovat extrakci pomocí SOLA SPE kazet a 96zdířkových destiček.
• Stanovení capecitabinu kvantifikovat HPLC-MS/MS s využitím Accucore PFP kolony a gradientní mobilní fáze.

Použitá metodika a instrumentace

• SPE extrakce: SOLA 10 mg kazeta nebo 96dobrých destiček; kondicionování metanolem a vodou, nanesení 100 µL plazmy, promytí 200 µL voda:metanol (80:20), eluce 250 µL metanolu, sušení dusíkem, rekonstituce 100 µL vody.
• Chromatografie: Accela 600 pumpa a CTC autosampler; Accucore PFP 2,6 µm (30×2,1 mm) kolona při 40 °C; mobilní fáze A = voda, B = acetonitril; gradient 0–5,0 min 100→0 % A/B, 5,1–6,5 min reekvilibrace; průtok 1,0 mL/min; injekční objem 10 µL.
• MS/MS detekce: Thermo Scientific TSQ Vantage s HESI v negativním módu; přechody m/z 358,30→154,21 pro capecitabine a 366,00→153,75 pro interní standard D8; kolizní energie 21 eV; kapilární teplota 300 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

• Retence capecitabinu i interního standardu během 1,8 min.
• Lineární rozsah 10–1000 ng/mL v plazmě s korelačním koeficientem R² = 0,99.
• Reprodukovatelnost: relativní standardní odchylka 2,3 % (n = 3) pro střední koncentraci.
• Recoverie: 73,2 % stanovená porovnáním overspiked extraktu a extrahovaného spiked vzorku.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimální objem vzorku (100 µL) a snížená spotřeba rozpouštědel.
• Vysoká čistota extraktů a nižší riziko kolizí s komplexní matricí.
• Rychlá chromatografie vhodná pro vysokoprodukční bioanalytické laboratoře.
• Vysoká přesnost a reprodukovatelnost vhodné pro farmakokinetické studie a terapeutické monitorování.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na multiplexní stanovení dalších fluoropyrimidinů a metabolitů.
• Automatizace a integrace s robotizovanými platformami pro vysokoprůtokové zpracování vzorků.
• Miniaturizace metody pro preklinické a klinické studie s omezeným vzorkem.
• Využití modulationních technik pro zlepšení citlivosti a selektivity v LC-MS/MS aplikacích.

Závěr

Kombinace SOLA SPE extrakce a rychlé LC-MS/MS separace na Accucore PFP koloni s TSQ Vantage umožňuje spolehlivé, citlivé a reprodukovatelné stanovení capecitabinu v malých objemech lidské plazmy, což přispívá k efektivnímu terapeutickému monitoringu.

Reference

1. Farkouh A., A Rapid and Simple HPLC Assay for Quantification of Capecitabine for Drug Monitoring Purposes; Anticancer Research. 2010;30:5207–5212.