Extraction of Oxytocin and Vasopressin from Serum Using EVOLUTE® EXPRESS ABN Prior to LC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Extrakce peptidů oxytocinu a vasopresinu z krevního séra a jejich analýza pomocí LC-MS/MS je klíčová pro biomedicínský výzkum a klinickou diagnostiku. Šetrná a reprodukovatelná příprava vzorků minimalizuje interferující proteiny, lipidy a fosfolipidy, čímž se zvyšuje citlivost a spolehlivost stanovení.

Cíle a přehled studie / článku

Tato studie popisuje optimalizaci rychlé a jednoduché extrakce oxytocinu a vasopresinu ze séra pomocí pevné fáze (SPE) na systému EVOLUTE EXPRESS ABN a jejich následnou kvantifikaci metodou ultrarychlé kapalinové chromatografie spojené s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS).

Použitá metodika

• Příprava vzorku: sérové vzorky fortifikovány 0,2–500 ng/mL oxytocinu a vasopresinu a ředěny 1:1 v roztoku 1 % kyseliny mravenčí ve vodě.
• SPE extrakce: 96-jamková deska EVOLUTE EXPRESS ABN, procedura Load–Wash–Elute minimalizující koexktrahované matrikové složky.
• Praní: interferenční látky odmyty 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě, eluace analyzátů 5 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu/vodě (20/80, v/v), objem eluátu 200 µl.
• Konzentrace: vysušení extraktu při 40 °C pomocí Biotage SPE Dry a rekonstituce v 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu/vodě (10/90, v/v), objem 200 µl.

Použitá instrumentace

• UPLC: Waters ACQUITY I-Class, kolona ACE C18-300 (50 × 2,1 mm, 1,7 µm).
• Mobilní fáze: fáze A – 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě, fáze B – 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu; gradient 90→67→90 % fáze A, průtok 0,4 ml/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 10 µl.
• MS/MS: Xevo TQ-S trojitý kvadrupól s elektrosprejovou ionizací v pozitivním módu, MRM přechody oxytocinu m/z 504,2→285,2 (quant), 1007,3→285,2 (qual); vasopresinu m/z 542,8→328,2 (quant), 542,8→757,2 (qual).

Hlavní výsledky a diskuse

• Recoveries: reprodukovatelné výtěžky extrakce nad 70 % s RSD nižšími než 10 % při koncentracích 0,2–500 ng/mL.
• Lineární kalibrace v rozsahu 0,2–500 ng/mL s koeficientem determinace r² > 0,99, nízké endogenní pozadí.
• Odstranění fosfolipidů: významné snížení fosfolipidového pozadí potvrzené MRM analýzou a post-column infusion experimenty.
• Post-column infusion: optimalizované eluce minimalizují ionizační potlačení, přímá injekce vede k mírně vyšším potlačením v některých regionech.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá, snadno automatizovatelná příprava vzorků pro vysokou propustnost analytických laboratoří.
• Široký lineární rozsah a vysoká citlivost vhodné pro klinické aplikace, farmakokinetické studie a výzkum hormonů.
• Snížené matricové interference zajišťují spolehlivou a reprodukovatelnou kvantifikaci v komplexních biologických matricích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace se zcela automatizovanými robotickými systémy pro další zlepšení reprodukovatelnosti a propustnosti.
• Rozšíření metodiky na analýzu dalších peptidových biomarkerů a ligandů neuroendokrinního systému.
• Využití v personalizované medicíně pro monitorování hormonálních terapií a farmakokinetické studie nových léčiv.

Závěr

Optimalizovaná metoda SPE s EVOLUTE EXPRESS ABN ve spojení s LC-MS/MS poskytuje robustní, citlivý a reprodukovatelný postup pro kvantifikaci oxytocinu a vasopresinu v séru. Vysoké výtěžky, nízké matricové interference a minimalizované ionizační potlačení činí tuto metodu vhodnou pro široké spektrum biomedicínských a klinických aplikací.

Reference

• Ve zdroji nebyly uvedeny žádné literární odkazy.