Extraction of a Drugs of Abuse Panel from Oral Fluid by ISOLUTE® SLE+ After Collection with the Quantisal™ Collection Device Prior to UPLC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Orální tekutina představuje cenný vzorek pro neinvazivní monitoring užívání omamných látek ve forenzních a klinických aplikacích.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem je popsat vývoj a optimalizaci jednoduchého postupu extrakce 47 drog a jejich metabolitů z orální tekutiny získané prostřednictvím zařízení Quantisal, použitím ISOLUTE SLE+ kolonek a následné analýzy UPLC-MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: orální tekutina v zařízení Quantisal, úprava přidáním 15 µl koncentrovaného amoniaku
• Extrakce: ISOLUTE SLE+ kolony (400 µl a 1 ml kapacity), 2× eluční fáze dichlormetanu, odsátí pod vakuem nebo přetlaku
• Sušení a rekonstituce: přidání 100 µl 50 mM HCl v methanolu, sušení (SPE Dry nebo TurboVap), rekonstituce 200 µl mobilní fáze
• Chromatografie: Waters ACQUITY UPLC, ACE EXCEL C18 1,7 µm (100×2,1 mm), gradient 5 mM amonium acetátu ve vodě a methanolu, 0,3 ml/min, teplota kolony 40 °C
• Detekce: Premier XE triple quadrupole MS s ESI v pozitivním módu, režim MRM s optimalizovanými přechody a energií kolize

Hlavní výsledky a diskuse

• Obnovy analyzátů dosahují 70–110 %, variabilita RSD 1,3–9,3 %
• Limit detekce (LOQ) v rozsahu <0,01–1 ng/ml pro různé třídy sloučenin při objemu vzorku 200 a 500 µl
• Linearity kalibračních křivek s koeficienty r2 > 0,99, při vyšších koncentracích doporučeno ředění
• Přídavek HCl v MeOH zlepšil stabilitu vybraných látek během sušení

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a reprodukovatelná extrakce bez tvorby emulzí
• Komplexní panel 47 analyzátů z jedné matrice
• Minimální vyžadovaný objem vzorku vhodný pro klinické a forenzní laboratoře
• Snadná adaptace na různé formáty kolonek a objemy

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit o další drogy a metabolity, automatizovat proces přípravy vzorku, využít pokročilé sorbenty pro vyšší citlivost a integrovat výsledky s umělou inteligencí pro pokročilou datovou analýzu.

Závěr

Navržený postup kombinuje efektivní SLE+ extrakci s citlivou detekcí pomocí UPLC-MS/MS. Metoda poskytuje vysoké obnovy, nízké LOQ a rychlou přípravu vzorku, což ji činí vhodnou pro forenzní, klinické i dopingové aplikace.

Reference

• Application Note AN832, Biotage, 2014