Analysis of THC and an Extended Metabolite Suite from Oral Fluid Using ISOLUTE® SLE+ Supported Liquid Extraction Columns Prior to LC-MS/MS

Význam tématu

Analýza THC a jeho metabolitů v ústní tekutině je klíčová pro forenzní toxikologii, dopravní bezpečnost, klinické hodnocení a kontrolu kvality. Rychlé a spolehlivé stanovení psychoaktivních kanabinoidů v malých odběrech slin usnadňuje detekci nedávné konzumace a doplňuje tradiční testy krve či moči.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo vyvinout a optimalizovat protokol extrakce THC a 10 dalších kanabinoidů z odběrových kitů Quantisal pomocí sloupků ISOLUTE SLE+ o vzorkovacím objemu 300 a 800 µl s následnou analýzou LC-MS/MS. Studie demonstrovala robustnost, opakovatelnost a vhodnost pro vysokopropustné rutinní laboratoře.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek ústní tekutiny byl předúpraven přidáním 10 µl koncentrované kyseliny mravenčí k úpravě pH na 3,6. Extrakce probíhala na sloupcích ISOLUTE SLE+ (400 µl či 1 ml) se trojitým elučním krokem: dvě dávky MTBE a jedna dávka hexanu. Eluát byl vysušen proudem dusíku/vzduchu (TurboVap LV) a rekonstituován v 200–500 µl 0,1 % HCOOH v H2O/ACN (60/40, v/v).

Použitá instrumentace

• ISOLUTE SLE+ 400 µl (820-0055-B) a 1 ml (820-0140-C) sloupce
• Positive Pressure Manifold (PPM-48)
• TurboVap LV (TurboVap 96)
• Waters ACQUITY UPLC s 20 µl injekční smyčkou, kolona Phenomenex Kinetex XB C18 50×2,1 mm, 2,6 µm
• Waters Ultima Pt MS, ESI+, režim MRM

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda poskytla čisté extrakty s průměrnými procenty recove­rie nad 64 % a RSD < 10 % pro všechny kanabinoidy. Kalibrační přímky vykázaly vynikající linearitu (r2 > 0,994) v rozmezí 1–200 ng/ml. Optimální pH extrakčního pufru (3,6) významně zlepšilo záchyt glukuronidových metabolitů. LOQ metody dosáhly 1–2 ng/ml s 5 µl injekčním objemem.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda je rychlá (celkový čas přípravy ~1,5 hod), snadno automatizovatelná, vysoce propustná a poskytuje reprodukovatelnou extrakci širokého spektra kanabinoidů. Vhodná pro forenzní laboratoře, klinické studie i QA/QC provozy.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Snižování LOQ a limitů detekce prostřednictvím menších reekonstitučních objemů nebo většího injekčního objemu
• Integrace s plně automatizovanými systémy pro extrakci a přímou online SPE
• Rozšíření spektra sledovaných metabolit na nově objevované kanabinoidy
• Miniaturizace metody pro mikrofluidní aplikace

Závěr

Popsaný protokol extrakce pomocí ISOLUTE SLE+ v kombinaci s LC-MS/MS představuje spolehlivou a efektivní metodu pro kvantifikaci THC a jeho metabolitů v ústní tekutině. Díky vysoké citlivosti, robustnosti a snadné automatizaci je ideální volbou pro rutinní analýzy v toxikologických a klinických laboratořích.

Reference

• Application Note AN815, Biotage 2014