GC/MSD, GC/MS/MS, GC/HRMS, Příprava vzorků, GC/Q-TOF
ZaměřeníMetabolomika
VýrobceAgilent Technologies, GERSTEL, Anatune
Význam tématu
Chromatografie spojena s hmotnostní spektrometrií (GC-MS) je klíčovou technikou v metabolomice díky vysoké reprodukovatelnosti a rozlišení.
Many polar metabolites require derivatizaci pro zvýšení volatility a termální stability.
Cíle a přehled studie
Cílem studie bylo zautomatizovat a porovnat tři derivatizační postupy pro GC-MS metabolomiku:
- MOX-TMS s použitím MSTFA
- MOX-TMS s použitím TMSCN
- terc-butyldimethylsilyl (tBDMS) derivaty s MTBSTFA
Vyhodnocena byla reprodukovatelnost, účinnost derivatizace a kvalita chromatogramů.
Použitá metodika a instrumentace
Derivatizace byla provedena na plně automatizovaném systému GERSTEL MPS Dual Head XL:
- Stanice pro rozpouštědla a promývání (Wash station)
- Vortexer a agitátor pro míchání vzorků
- Multiposition Evaporation Station (mVAP) pro sušení
- CF-200 robotické centrifugy
Po MOX kroku (methoximation) následoval silylační krok při 37 °C (MSTFA nebo TMSCN) nebo 90 °C (MTBSTFA).
Analýza proběhla na Agilent 7890B GC spojeném s Q-TOF 7200B MS.
Hlavní výsledky a diskuse
Všechny tři workflow byly úspěšné a reprodukovatelné, podle interních standardů:
- Průměrná retenční doba RSD ≤ 0,1 %
- Plochy signálů RSD kolem 10 %
Chromatogramy ukázaly, že TMSCN redukuje pozadí v rané části eluce ve srovnání s MSTFA.
tBDMS deriváty vykázaly nižší počet sloučenin, ale vyšší podíl zásahů s match faktorem > 90 (30 % vs. 20 % u TMS).
Přínosy a praktické využití metody
Automatizace zrychluje přípravu vzorků a snižuje riziko chyb operátora.
Vyšší čistota chromatogramů zvyšuje citlivost a spolehlivost identifikace metabolit.
Budoucí trendy a možnosti využití
Další optimalizace reagentů a teplotních protokolů.
Integrace s pokročilou datovou analýzou a databázovými nástroji.
Možnost rozšíření na ostatní typy metabolitů a vysokopropustné platformy.
Závěr
Automatizované workflow MOX-TMS (MSTFA a TMSCN) a tBDMS (MTBSTFA) jsou robustní, opakovatelné a vhodné pro vysoce výkonnou metabolomickou analýzu.
Reference
- Khakimov A. et al. The use of trimethylsilyl cyanide derivatisation for robust and broad-spectrum high-throughput GC-MS metabolomics. Anal Bioanal Chem (2013) 405:9193.
- Ohie T. et al. GC-MS with tert-butyldimethylsilyl derivatisation for screening organic acidemias. J Chromatogr B, 746 (2000) 63–73.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
