Fully automated on-line Folch Extraction and trans-methylation of fatty acids in salmon tissue

Význam tématu

Automatizace extrakce lipidů metodou Folch a jejich přímé transmethylace zvyšuje reprodukovatelnost a snižuje analytickou variabilitu v metabolomických studiích. Precizní příprava vzorků je nezbytná pro přesné rozlišení biologických rozdílů v obsahu mastných kyselin.

Cíle a přehled studie

Cílem byla implementace plně automatizovaného online postupu pro extrakci salmoní tkáně, přímé transmethylace mastných kyselin a jejich analýzu pomocí GC-QTOF MS. Studie porovnala klasickou homogenizaci s mechanickým rozrušením (beads beating) v rámci Folch extrakce.

Použitá metodika

Extrakce proběhla na 50 mg salmoní tkáně přidáním 1 mL směsi chloroform/methanol (2:1). Agitace na Gerstel mVORX po dobu 30 min a následná centrifugace umožnily oddělení organické fáze, kterou se následně vysušilo v Gerstel mVAP a rekonstituovalo v 100 µL toluenu. Transmethylace proběhla při 70 °C po dobu 30 min v přítomnosti 3N metanolické HCl. Produkt byl extrahován hexanem, oddělen od vodné fáze a horní organická vrstva injektována do GC-MS.

Použitá instrumentace

• Gerstel MultiPurpose Sampler 2 XL Dual Head
• Gerstel Multiposition Vortexer mVORX
• Gerstel Multiposition Evaporation Station mVAP
• Anatune CF-200 Robotic Centrifuge
• Agilent 7890B Gas Chromatograph
• Agilent 7200B Q-TOF High-Resolution Accurate-Mass Mass Spectrometer

Hlavní výsledky a diskuse

• Chromatografické profily z klasické Folch extrakce a beads beating byly vysoce podobné.
• Bylo identifikováno několik klíčových mastných kyselin jako methyl tetradecanoate, methyl hexadecanoate, methyl stearate a omega-3 estery (9,12,15-octadecatrienoate, eicosapentaenoate, docosahexaenoate).
• Reprodukovatelnost byla pro obě metody výborná (RSD < 10 %).

Přínosy a praktické využití metody

• Robustní a plně automatizovaný postup minimalizuje chyby obsluhy.
• Standardizace přípravy vzorků podporuje rutinní analýzy v QA/QC a výzkumu.
• Metoda je aplikovatelná na různé biologické i potravinové matice.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s LC-MS pro komplexní lipidomické studie.
• Miniaturizace a paralelní zpracování vzorků pro vyšší propustnost.
• Využití v klinických studiích a průmyslovém monitoringu kvality potravin.

Závěr

Vyvinutý plně automatizovaný postup pro online Folch extrakci a transmiselyaci mastných kyselin v salmoní tkáni prokázal vysokou reproducibilitu a efektivitu. Metoda je vhodná pro rutinní nasazení v laboratořích zaměřených na lipidomiku.

Reference

• Folch J. et al., J. Biol. Chem. 1957, 226: 497-509
• Anatune Application Note AS 136, O’Connor S., Hawkins N.: Automated Derivatisation and Extraction of Fatty Acids using Gerstel MPS and Agilent 7890/7200 GC/Q-TOF