Determination of Aflatoxin M1 via FREESTYLE ThermELUTE™ with Online HPLC-Measurement

Význam tématu

Aflatoxin M1 je metabolit aflatoxinu B1 obsaženého v krmivech a představuje významné zdravotní riziko při konzumaci mléka a mléčných výrobků. Evropské nařízení stanovují přísné limity na jeho obsah v potravinách, což vyžaduje spolehlivé a citlivé analytické metody.

Cíle a přehled studie

Cílem je prezentovat rychlou a automatizovanou metodu pro kvantifikaci aflatoxinu M1 v různých mléčných matricích. Metoda kombinuje extrakci, čištění na imunoadsorpční kolonce AflaCLEAN M1 SMART a online HPLC se světelnofluorescenční detekcí. Celý proces je dokončen za cca 30 minut a umožňuje měření v nižších oblastech ppt.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky jsou extrahovány podle protokolu pro různé mléčné produkty, naředěny a přefiltrovány. Automatizovaná čistící jednotka FREESTYLE ThermELUTE zpracovává nijak upravené vzorky na imunoadsorpčních kolonkách. Po eluaci probíhá přímá injekce do HPLC s fluorescenčním detektorem. Metoda využívá:

• FREESTYLE ThermELUTE
• Imunoadsorpční kolonka AflaCLEAN M1 SMART
• HPLC se světelnofluorescenčním detekčním systémem
• RP C18 kolonka pro separaci
• Mobilní fáze acetonitril/voda/metanol

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje vysokých průměrných výtěžností: 96 % v mléce, 90 % v surovém mléce a 98 % v mléčném prášku při nasycení 80 ppt. Chromatogramy ukazují ostré píky aflatoxinu M1 a nízké pozadí, což potvrzuje citlivost v nižších ppt. Díky paralelnímu zpracování je kapacita přes 70 vzorků za den.

Přínosy a praktické využití metody

• Automatizace snižuje pracovní náročnost a riziko chyb
• Rychlost: kompletní analýza za přibližně 30 minut
• Vysoká citlivost v dolním ppt rozsahu
• Splňuje požadavky legislativy EU na limity aflatoxinu M1
• Vhodné pro rutinní kontrolu kvality mléčných produktů

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit na simultánní stanovení dalších mykotoxinů zapojením multiplexních kolonek a optimalizací chromatografických podmínek. Integrace s detekcí hmotnostní spektrometrií by mohla zvýšit selektivitu a citlivost. Dále se očekává širší implementace v on-line systémech a digitálních laboratořích.

Závěr

Prezentovaná metoda nabízí rychlou, citlivou a plně automatizovanou cestu pro kvantifikaci aflatoxinu M1 v mléčných matricích. Vysoké výtěžnosti, nízká meziproduktová variabilita a vysoká kapacita zpracování ji předurčují k využití v provozních laboratořích zaměřených na bezpečnost potravin.

Reference

• AOAC Official Method 2000.08 Aflatoxin M1 in Liquid Milk Immunoaffinity Column by Liquid Chromatography
• DIN EN ISO 14501 Analýza aflatoxinu M1 v mléce a mléčném prášku
• Regulation EU 165/2010 Amending Regulation EC 1881/2006 on maximum levels of aflatoxins in foodstuffs
• H. Marina Martins Aflatoxin M1 determination in cheese by immunoaffinity column clean-up coupled to high-performance liquid chromatography RPCV 2007 102(563-564) 321-325