Analysis of Testosterones Using a Core Enhanced Technology Accucore HPLC Column

Význam tématu

Stanovení derivátů testosteronu je klíčové pro kontrolu dopingu, farmakokinetické studie a klinickou diagnostiku. Rychlá a efektivní chromatografická separace těchto sloučenin zkracuje dobu analýzy a zvyšuje kapacitu laboratoří.

Cíle a přehled studie

Cílem této application note bylo demonstrovat schopnost Thermo Scientific Accucore RP-MS kolony o rozměrech 100 × 2,1 mm a velikosti částic 2,6 µm k rychlé separaci tří strukturálně příbuzných testosteronů (11-ketotestosteron, 19-nortestosteron, epitestosteron) během méně než 2 minut.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byla využita tato sestava:

• Kolona: Accucore RP-MS 2,6 µm, 100 × 2,1 mm
• Chromatograf: Thermo Scientific Accela
• Teplota kolony: 40 °C
• Průtok mobilní fáze: 0,6 mL/min
• Mobilní fáze: voda/acetonitril (60:40, obj.)
• Detekce: UV při 254 nm
• Injekce vzorku: 1 µL standardu (50 µg/mL každého testosteronu v mobilní fázi)

Hlavní výsledky a diskuse

Separační systém dosáhl úplné rozlišení tří analyzovaných sloučenin v čase kratším než 2 minuty. Hodnoty asymetrie píků se pohybovaly mezi 1,11 a 1,48, relativní odchylky retence (%RSDtr) byly nižší než 0,1 %, plochy píků vykázaly %RSD pod 0,5 %. Nízký zpětný tlak (<300 bar) potvrzuje výhody příčně pórové technologie v porovnání s plně pórovými sub-2 µm materiály.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda přináší následující výhody:

• Výrazné zkrácení doby analýzy a zvýšení propustnosti vzorků
• Nízký provozní tlak umožňuje delší životnost systému
• Vysoká účinnost a nízké šumné interakce zajišťují ostré a symetrické píky
• Aplikace v dopingových laboratořích, farmaceutickém vývoji a QA/QC průmyslové analytice

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj stacionárních fází s optimalizovanou porozitou a modifikacemi pro přímou hyphenaci s hmotnostní spektrometrií. Miniaturizace HPLC systémů a ultrarychlé gradientní metody přinesou ještě vyšší vzorkovací kapacity v klinických a forenzních laboratořích.

Závěr

Accucore RP-MS kolona prokázala schopnost rychlé, reprodukovatelné a účinné separace tří testosteronů za velmi nízkého zpětného tlaku. Metoda je vhodná pro vysokopropustné rutinní analýzy v oblasti kontroly dopingu i farmaceutického výzkumu.

Reference

• Gartland J. Analysis of Testosterones Using a Core Enhanced Technology Accucore HPLC Column. Thermo Fisher Scientific Application Note ANCCSCETTESTOST, 2011.