Fast, Quantitative SPE LC-MS/MS Analysis of Montelukast in Human Plasma

Význam tématu

Astma postihuje stovky milionů lidí na celém světě a vyžaduje spolehlivé bioanalytické metody pro monitorování léčivých látek, jako je montelukast. Rychlá a přesná kvantifikace montelukastu v lidské plazmě je klíčová pro výzkum a vývoj nových léčebných postupů, kvalitu výroby a klinické studie.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit rychlou, robustní a citlivou metodu pro extrakci a kvantifikaci montelukastu v lidské plazmě. Použit byl kombinovaný postup pevné fáze (SPE) se stanicí SOLA SAX a vysoce účinná kapalinová chromatografie s hmotnostní detekcí (UHPLC-MS/MS) na kolóně Accucore C8.

Použitá metodika a instrumentace

Sample preparation:

• Odběr plazmy, přídavek vnitřního standardu (montelukast d6) a proteinové srážení methanolem.
• Odstředění a aplikace supernatantu na SPE desku SOLA SAX (10 mg, 96 well).
• Podmínění, ekvilibrace, nabití, dvoufázové praní a eluční krok methanolem s kyselinou fosforečnou.
• Úprava polarity eluátu přidáním vody a sonikací.

Chromatografické podmínky:

• HPLC systém Thermo Scientific Dionex UltiMate 3000 RSLC.
• Kolona Accucore C8, 2.6 µm, 50 × 2.1 mm s guard kolónou Accucore C8 10 × 2.1 mm.
• Gradientní eluční režim voda + 0,1 % kyseliny mravenčí a acetonitril + 0,1 % kyseliny mravenčí, průtok 1,0 mL/min, teplota 60 °C, doba analýzy 1,5 minuty.

Hmotnostní spektrometrie:

• Thermo Scientific TSQ Vantage, elektrosprejová ionizace (HESI), pozitivní režim.
• Monitorované přechody m/z 586.2→422.2 pro montelukast a 592.2→427.3 pro montelukast d6.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární dynamický rozsah 1–1000 ng/mL s koeficientem determinace R2=0,9901. Limitem kvantifikace (LOQ) byl 1 ng/mL. Precision (RSD) na úrovni high, medium a low QC vzorků byla 2,5 %, 5,7 % a 10,6 %. Průměrná výtěžnost extrakce byla 89 %. UHPLC kolona účinně oddělila cis/trans izomery montelukastu během 1,04 minuty.

Přínosy a praktické využití metody

• Velmi rychlá analýza pod 1,5 minuty vhodná pro vysokoprůtokové aplikace.
• Nízká spotřeba rozpouštědel díky optimalizované SPE.
• Vysoká čistota extraktů a citlivost detekce.
• Vysoká reprodukovatelnost a nízké RSD.
• Možnost adaptace na další bioanalytické studie a klinické farmakokinetické aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metodiky na stanovení dalších leukotrienových antagonistů a farmakokinetickou analýzu kombinovaných terapií. Dalším směrem je automatizace přípravy vzorků, miniaturizace a využití zelenějších rozpouštědel pro udržitelné laboratorní postupy.

Závěr

Vyvinutá SPE UHPLC-MS/MS metoda s použitím SOLA SAX SPE desek a Accucore C8 kolony nabízí rychlou, robustní a citlivou kvantifikaci montelukastu v lidské plazmě. Metoda splňuje požadavky na vysokou přesnost, reprodukovatelnost a nízkou spotřebu rozpouštědel, což ji činí ideální pro bioanalytické a klinické aplikace.

Reference

• Merck Pharmaceuticals. Singulair® Product Monograph. 2012.
• DailyMed. Singulair Archive FDA Drug Information. 2012.
• DrugBank. DB00471 Montelukast. 2012.
• Wikipedia. Montelukast skeletal formula. 2012.