Quantification of Catecholamines and Metanephrines in Urine Using the Thermo Scientific™ TSQ Endura™ Mass Spectrometer for Research Use

Význam tématu

V klinickém a výzkumném kontextu hrají katecholaminy (adrenalin, noradrenalin, dopamin) a jejich metabolity (metanephrin, normetanephrin) klíčovou roli jako biomarkery neuroendokrinních dysregulací a tumorů chromafinních buněk. Spolehlivá a citlivá analýza těchto sloučenin v moči je nezbytná pro diagnostiku feochromocytomu, neuroblastomu a poruch autonomního nervového systému.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl vyvinout rychlou a robustní metodu stanovení adrenalinu, noradrenalinu, dopaminu, metanephrinu a normetanephrinu v moči pomocí kapalinové chromatografie spojené s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS). Metoda se zaměřuje na jednoduchou přípravu vzorku, minimalizaci matrix efektu a zajištění vysoké průkaznosti a přesnosti pro výzkumné použití.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorek: 1 mL centrifugované moči upravené na pH 9,5.
• Extrakce: kapalně-kapalná extrakce (LLE) s ethylacetátem a 2-aminoethyl diphenylboronátem jako komplexotvorným činidlem.
• Odpaření a rekonstituce: sušení dusíkem a doplnění mobilní fází A.
• Chromatografie: Thermo Scientific UltiMate 3000RS s 10minutovým gradientem na kolóně Acclaim Mixed Mode WCX-1 (2,1 × 150 mm, 3 μm) při 40 °C.
• Detekce: TSQ Endura triple quadrupole MS se zdrojem HESI v pozitivním režimu, režim SRM pro kvantifikaci a potvrzení přítomnosti.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odpověď v rozsahu 0,4–900 ng/mL se součinitelem korelace nad 0,998. Dolní limit kvantifikace (LLOQ) dosahuje 0,4 ng/mL pro všechny analyty. Intraday i interday přesnost (%RSD) byla pod 15 % pro nejnižší koncentrace a pod 10 % pro vyšší úrovně. Matrix efekt se pohyboval v rozsahu 85–130 %, což ukazuje na uspokojivou potlačenou nebo mírně zvýšenou ionizaci. Získaná data potvrzují vysokou opakovatelnost a věrnost kvantifikace.

Přínosy a praktické využití metody

• Zjednodušená příprava vzorku bez nutnosti SPE kazety.
• Vysoká citlivost a široký lineární rozsah vhodný pro různé klinické koncentrace.
• Použití stabilních izotopových interních standardů zvyšuje přesnost.
• Metoda je vhodná pro výzkumné laboratoře provádějící rutinní měření katecholaminů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metodiky o automatizované přípravné robotické platformy, miniaturizaci extrakcí a multiplexní analýzu dalších neuroendokrinních markerů. Integrace s high-throughput systémy a rozšíření na jiné biologické matice (plazma, sérum) zvýší využitelnost metody.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda kombinuje jednoduchou přípravu vzorku s robustní kvantifikací katecholaminů a metanephrinů v moči. Splňuje nároky výzkumných laboratoří na citlivost, linearitu, přesnost a spolehlivost v rámci klinických studií.

Reference

1. D. Talwar et al. J. Chromatogr. B 769 (2002) 341–349