Quantification of Catecholamines and Metanephrines in Urine Using the Thermo Scientific™ TSQ Endura™ Mass Spectrometer for Research Use

Význam tématu

Urgentní a spolehlivá kvantifikace katecholaminů a jejich metabolitů v moči je kritická pro diagnostiku a výzkum onemocnění nadledvin, neurodegenerativních poruch a endokrinních nádorů. Moderní LC–MS/MS metody poskytují vysokou selektivitu, citlivost a robustnost, což je zásadní pro klinickou i výzkumnou praxi.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout a validovat rychlou, jednoduchou a přesnou metodu pro současnou determinaci adrenalinu, noradrenalinu, dopaminu, metanefrinu a normetanefrinu v moči. Autoři představili postup založený na kapalinně-kapalinové extrakci (LLE) a detekci pomocí Triple Quadrupole MS ve režimu SRM.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá:

• Sample preparation: LLE s ethylacetátem a 2-aminoethyldiphenylboronátem pro komplexaci katecholových hydroxylů (pH 9,5), následné odpaření a rehydrataci ve vodném mobilní fázi.
• Chromatografie: Gradientní eluce na Acclaim Mixed Mode WCX-1 kolóně (2,1 × 150 mm, 3 μm) s mobilními fázemi 2 mM formiátu amonného + 0,1 % kyseliny mravenčí a acetonitrilem + 0,1 % kyseliny mravenčí. Doba analýzy 10 min, injekční objem 10 μL, teplota 40 °C.
• Hmotnostní spektrometrie: Thermo Scientific TSQ Endura, HESI v pozitivním režimu, SRM s jednou kvantifikační a jednou potvrzující tranzicí na analyt, okno 0,5 s.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje lineárního rozsahu 0,4–900 ng/mL se společným LLOQ 0,4 ng/mL. Korelační koeficienty (R²) překračují 0,998 pro všechny anality. Intra-denní přesnost (%RSD) se pohybovala pod 15 % a mezidení přesnost pod 20 %. Matrixové efekty byly v rozmezí 83–204 %, což indikuje stabilní potlačení nebo podporu signálu.

Přínosy a praktické využití metody

Díky jednoduché LLE přípravě vzorku a krátké době analýzy metoda nabízí efektivní nástroj pro výzkumné laboratoře a klinické studie zaměřené na monitoring katecholaminů bez nutnosti složité SPE extrakce.

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace vysokofrekvenčního monitoringu v reálném čase a miniaturizace přípravy vzorku by mohla dále zvýšit throughput. Potenciál má též rozšíření o další polaritní metabolity a využití mikroflow LC pro snížení spotřeby rozpouštědel.

Závěr

Předložená LC–MS/MS metoda splňuje požadavky na citlivost, přesnost a robustnost pro kvantifikaci katecholaminů a metanefrinů v moči. Jednoduchá příprava vzorku a krátký cyklus analýzy podporují její aplikaci v klinickém výzkumu.

Reference

• 1. Talwar D. et al. J. Chromatogr. B 769 (2002) 341–349