Clinical research method for the quantitative determination of free plasma serotonin and 5-hydroxyindoleacetic acid (5-HIAA) in human plasma by UHPLC-MS/MS

Význam tématu

V moderní klinické praxi je sledování hladin serotoninu a jeho hlavního metabolitu 5-HIAA klíčové pro hodnocení účinnosti a bezpečnosti léčby antidepresivy, zejména SSRI, a prevenci serotonergní toxicity.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout robustní a reprodukovatelnou metodu pro kvantitativní stanovení volného plazmatického serotoninu a 5-HIAA ve formátu 96-well pro klinický výzkum, využívající SOLA SAX SPE pro očistu a UHPLC-MS/MS pro analýzu.

Použitá metodika a instrumentace

Analytická metodika zahrnuje:

• Předúpravu vzorků pomocí SOLA SAX 96-well SPE desek s použitím 1 % NaOH a elučního roztoku acetonitril/kyselej kyseliny mravenčí.
• Suchou extrakci pod dusíkem a rektifikaci v roztoku voda/kyselej kyseliny mravenčí.

Instrumentace:

• Vanquish Horizon UHPLC systém s kolonkou Acclaim Vanquish PA2 (2.2 μm, 150 × 2.1 mm).
• TSQ Quantiva triple-quad MS/MS s HESI-II zdrojem.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační rozsahy: serotonin 1–100 ng/mL (lineární model, váha 1/x2), 5-HIAA 5–500 ng/mL (kvadr. model, váha 1/x2). LLOQ dosahuje 1 ng/mL pro serotonin a 5 ng/mL pro 5-HIAA.

• Přesnost a přesnost: bias −5.2 až 5.3 % (CV 1.5–2.1 %) pro serotonin; bias −19.5 až 14.4 % (CV 2.2–10.5 %) pro 5-HIAA.
• Recovery: 67.0 % pro serotonin a 58.1 % pro 5-HIAA.
• Matrix efekty minimalizované interními standardy: normalizovaný faktor ~1.01.
• Carry-over pod 20 % LLOQ a vysoká specifita bez interferencí.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje automatizované a vysoce propustné stanovení serotoninu a 5-HIAA v jednom injekčním běhu s vynikající selektivitou, citlivostí a reproducibilitou, vhodné pro klinický výzkum a monitorování pacientů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další automatizace a rozšíření na vyšší multiplexní analýzy biogenních aminů.
• Integrace do rutinních klinických laboratoří a vývoje personalizované medicíny.
• Miniaturizace a zrychlení analýz pro bod-of-care aplikace.

Závěr

Vyvinutá UHPLC-MS/MS metoda s předúpravou SOLA SAX SPE nabízí rychlé, spolehlivé a kvantitativní stanovení serotoninu a 5-HIAA v lidské plazmě, což přispívá ke zlepšení klinického výzkumu a bezpečnějšímu sledování terapií.

Reference

• Taylor C., Woodmansey K. Technical Note 21966. Thermo Fisher Scientific, 2019.