Quantification of eight antimycotics in human plasma using an Orbitrap Exploris 120 high-resolution accurate mass mass spectrometer for clinical research

Význam tématu

Antimykotika jsou nezbytná pro léčbu a prevenci závažných plísňových infekcí, zejména u imunokompromitovaných pacientů, a vyžadují účinné monitorování léčebných hladin v krvi z důvodu úzkého terapeutického okna.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a validovat rychlou kvantitativní metodu pro stanovení osmi antimykotik v lidské plazmě pomocí Orbitrap Exploris 120 v kombinaci s Vanquish Flex UHPLC za 3,5 minuty analýzy.

Použitá metodika

• Příprava vzorku: 50 µL plazmy s přídavkem stabilně značených interních standardů, srážení proteinů, centrifugace a desetinné ředění supernatantu.
• Chromatografie: Vanquish Flex UHPLC, analytická kolona RECIPE, gradientní eluce (0–98 % organiky) během 3,5 minuty, průtok 0,6 mL/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 5 µL.
• Detekce: Orbitrap Exploris 120 s H-ESI v pozitivním módu, Full Scan (m/z 70–1400, rozlišení 60 000) pro kvantifikaci a ddMS2 (rozlišení 15 000) pro potvrzení identifikace.
• Vyhodnocení: 1/x vážená kalibrace v TraceFinder 5.1, hodnocení linearity, mezní kvantifikace, přesnosti, opakovatelnosti a carryover.

Použitá instrumentace

• Vanquish Flex Binary UHPLC systém (Thermo Fisher Scientific)
• Orbitrap Exploris 120 vysokorozlišovací hmotnostní spektrometr (Thermo Fisher Scientific)
• Software TraceFinder 5.1
• Laboratorní centrifuga a vortex

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární odezva pro všechny analyty s biasem ±10 %.
• LLOQ v rozmezí 0,0233–0,490 mg/L.
• Přesnost (bias) kontrolních úrovní -4,3 až 6,0 %.
• Intra-assay CV < 9,3 %, inter-assay CV < 7,0 %.
• Bez významného carryover po nejvyšším standardu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí rychlou analýzu s minimální přípravou vzorku, vysokou selektivitou a citlivostí vhodnou pro klinický výzkum a terapeutické monitorování antifungálních léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnosti rozšíření panelu analyzovaných látek, automatizace přípravy vzorku a integrace do rutinních klinických workflow pro zlepšené terapeutické rozhodování.

Závěr

Popsaná metoda je robustní, citlivá a rychlá, splňuje požadavky výzkumných i klinických pracovišť a umožňuje spolehlivé stanovení osmi antimykotik v lidské plazmě.