Quantification of eight antimycotics in human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry for clinical research

Význam tématu

Antimykotika mají úzký terapeutický index a proměnlivou farmakokinetiku, proto je jejich přesná kvantifikace v plazmě nezbytná pro optimální léčebné řízení pacientů. Tradiční HPLC metody vyžadují složité extrakční postupy, zatímco moderní LC–MS/MS přináší vyšší selektivitu a zkrácení doby analýzy.

Cíle a přehled studie

Práce si klade za cíl vyvinout a validovat rychlou a citlivou metodu pro simultánní stanovení osmi antimykotik v lidské plazmě v čase 3,6 minuty. Studie zkoumá linearitu, LLOQ, přesnost, opakovatelnost i mezidenní variabilitu metody.

Metodika

Vzorek plazmy (50 µl) byl deproteinován acetonitrilem s vnitřními standardy, poté byl supernatant naředěn a injektován do UHPLC. Chromatografie probíhala na kolóně Hypersil GOLD (50×2,1 mm, 1,9 µm) gradientem vody/formiové kyseliny a acetonitrilu/formiové kyseliny. MS detekce byla realizována v SRM režimu za použití HESI v pozitivním módu.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Thermo Scientific Vanquish Flex Binary
• Triple kvadrupólový MS Thermo Scientific TSQ Quantis
• Kolona Hypersil GOLD 50×2,1 mm, 1,9 µm
• Zdroj HESI pro pozitivní ionizaci
• Softwarové zpracování TraceFinder 5.1

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odezvu (1/x vážení) s biasem kalibrátorů do ±6 %. LLOQ pro jednotlivé látky se pohybovaly od 0,0138 do 0,245 mg/l. Intradení i mezidenní přesnost byla <12,4 % CV, bias kontrolních vzorků se pohyboval mezi –5,5 % a 5,1 %. Nebyl zaznamenán žádný carryover.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza osmi antimykotik za méně než 4 minuty
• Jednoduchá offline proteinová precipitace
• Vysoká citlivost a selektivita díky SRM detekci
• Vhodné pro klinické farmakokinetické studie a TDM

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze dále rozšířit o další léčiva či jejich metabolity, zavést plně automatizovanou přípravu vzorků nebo on-line extrakci. Potenciál spočívá v aplikacích v personalizované medicíně a ve výzkumu rezistence k antimykotikům.

Závěr

Vyvinutá LC–MS/MS metoda splňuje požadavky na rychlost, přesnost a citlivost pro kvantifikaci osmi antimykotik v plazmě a je vhodná pro výzkumné klinické aplikace.