Quantification of 15 tricyclic antidepressants in human plasma by LC-HRAM-MS using the Orbitrap Exploris 120 mass spectrometer for clinical research

Význam tématu

Tricyklická antidepresiva představují významnou skupinu psychoaktivních látek využívaných při léčbě depresí, úzkostí a bolesti. Přesná kvantifikace jejich hladin v lidské plazmě podporuje monitorování terapie a farmacokinetické studie. Metody s vysokým rozlišením (HRAM) zajišťují citlivost a spolehlivost výsledků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, robustní a validovanou LC-HRAM-MS metodu pro simultánní kvantifikaci 15 tricyklických antidepresiv v lidské plazmě. Analýza probíhala na UHPLC systému Vanquish Flex spojeném s Orbitrap Exploris 120 MS, s jednoduchou přípravou vzorku a vysokou propustností (méně než 8 minut na vzorek).

Použitá metodika a instrumentace

Metoda zahrnovala:

• Proteinovou precipitaci 50 µL plazmy acetonitrilem s přidanými deuterovanými interními standardy.
• Chromatografii na kolóně Hypersil GOLD Phenyl 2.1 × 100 mm, 1.9 µm při 40 °C, gradient 10–100 % metanolu (5 mM amoniového formiátu + 0,1 % formiové kyseliny) během 8 minut při průtoku 0,5 mL/min.
• Detekci na Orbitrap Exploris 120 s HESI zdrojem v pozitivním ionizačním módu, rozlišení 60 000 (FWHM) při m/z 200, skenovací rozsah 100–500 m/z.
• Datovou analýzu a zpracování pomocí softwaru TraceFinder 5.1 a komerčních kalibrátorů a standardů ClinMass (RECIPE Chemicals + Instruments).

Použitá instrumentace

• UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Flex Binary.
• Analytická kolona: Hypersil GOLD Phenyl 2.1 × 100 mm, 1.9 µm.
• MS detektor: Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 s HESI zdrojem.
• Software: TraceFinder 5.1; kalibrátory, kontroly a interní standardy ClinMass.

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární rozsahy pro 15 analyzovaných TCA vykázaly koeficient determinace R2 > 0,9989 s akurátností 98–102,8 % a precizností <3 % v kalibračních hladinách L1–L3. Možnost rozšíření dolní mezní kvantifikace (LLOQ) na 0,82–6,04 µg/L byla potvrzena při zachování přesnosti 80–120 % a CV <20 %.
Intra-assay: akurátnost 95–113 %, preciznost <7,8 %. Inter-assay: akurátnost 98–111,6 %, preciznost <6,1 %. Celkový analytický cyklus proběhl pod 8 minut s vysokým rozlišením a minimálními nároky na přípravu.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá a rychlá příprava vzorků bez nutnosti složitých extrakcí.
• Vysoká citlivost a spolehlivost vhodná pro klinický monitoring a farmakokinetické studie.
• Současná kvantifikace 15 TCA šetří čas, materiál a zvyšuje propustnost laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

Ve světle vysoké citlivosti a rozsahu lze metodu rozšířit na sledování nízkých plazmatických hladin TCA po dávkování. Integrace automatizovaného zpracování vzorků a high-throughput platforem podpoří personalizovanou medicínu a rozšířenou farmakokinetickou analýzu.

Závěr

Navržená LC-HRAM-MS metoda na platformě Vanquish Flex a Orbitrap Exploris 120 splňuje požadavky klinického výzkumu na rychlou, přesnou a precizní kvantifikaci tricyklických antidepresiv v lidské plazmě. Jednoduchý workflow a vynikající analytické parametry ji činí vhodnou pro farmakokinetické studie a terapeutické monitorování.

Reference

• Barcenas M., Olin M. Quantification of 15 tricyclic antidepressants in human plasma by LC-HRAM-MS using the Orbitrap Exploris 120. Thermo Fisher Scientific, 2021.