Quantitation of 5 Nitrosamines in Metformin API and Formulation by HS-GCMS/MS

Význam tématu

Stanovení nitrosaminů v léčivých přípravcích je kritické vzhledem k jejich karcinogenním vlastnostem a přísným regulačním limitům stanoveným USFDA. Metformin, široce používaný antidiabetikum, musí být uvolňován bez přítomnosti nitrosaminů nad 30 ppb celkově, aby byla zajištěna bezpečnost pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a ověřit kvantitativní metodu pro pět vybraných nitrosaminů (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA) v API a finálních formulacích metforminu pomocí HS-GCMS/MS na přístroji Shimadzu GCMS-TQ8040 NX se headspace autosamplerem HS-20.

Použitá metodika a instrumentace

• GCMS systém: Shimadzu GCMS-TQ8040 NX s headspace modulem HS-20
• Kolona: SH-Stabilwax DA, 60 m × 0,25 mm I.D., film 0,25 µm
• GC program: 40 °C (0 min) → 230 °C při 20 °C/min (hold 10,5 min)
• Carrier gas: helium, linear velocity 44,2 cm/s, splitless injekce
• HS podmínky: teplota peci 135 °C, přenosová linka 180 °C, vzorek line 150 °C, tlak 105 kPa, třepání a doba ekvilibrace 10 min
• MS podmínky: EI režim, ion source 200 °C, interface 230 °C, CID s Ar při 200 kPa, MRM optimalizované pro každou NSA
• Kalibrace: pětiúrovňová 1–20 ppb v DMSO, interní standard NDMA-d6

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearity: rozsah 1–20 ppb (NEIPA 3,3–66,7 ppb), koeficient determinace r2 > 0,996
• LOQ: 1,0 ppb pro všechny NSA, odpovídající kombinované LOQ 16,5 ppb
• S/N poměr na LOQ: 51–366, opakovatelnost RSD < 11 % (n=6)
• Recovery při LOQ v API i FDF: 90–115 %
• Metoda splňuje USFDA limity pro celkové nitrosaminy v metforminu (≤ 30 ppb při 880 mg MDD)

Přínosy a praktické využití metody

• Citlivé a spolehlivé stanovení nitrosaminů v API i finálních formulacích
• Splnění regulačních požadavků USFDA pro karcinogenní impurity
• Vhodné pro rutinní kontrolu kvality ve farmaceutických laboratořích
• Vysoká robustnost a dlouhodobá stabilita signálu díky špičkovému iontovému zdroji a kolizní buňce

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření metody na další genotoxické impurity a API, integrace s automatizovanými systémy pro vyšší průtok, využití HRMS pro simultánní screening neutrálních a nabitých znečišťujících látek, a nasazení AI-podpory pro rychlejší vyhodnocení dat.

Závěr

Popsaná HS-GCMS/MS metoda na Shimadzu GCMS-TQ8040 NX s HS-20 umožňuje spolehlivé stanovení pěti nitrosaminů v metforminu pod hranicí regulačních limitů. Metoda nabízí vysokou citlivost, reprodukovatelnost a splňuje požadavky pro rutinní QA/QC a výzkumné aplikace.

Reference

• USFDA Industry Guidance on Nitrosamines Impurities v Human Drugs