Quantitation of 6 Nitrosamines in Losartan API by LC-MS/MS system as per the proposed USP General Chapter <1469>

Význam tématu

Detekce nitrosaminů v léčivých přípravcích je zásadní z hlediska bezpečnosti pacientů i souladu s přísnými regulačními požadavky. Nitrosaminy patří mezi pravděpodobné karcinogeny, jejich přítomnost v aktivních farmaceutických ingrediencích (API) musí být monitorována na úrovni stopových koncentrací.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout a ověřit kvantitativní LC-MS/MS metodu pro šest klíčových nitrosaminů (NDMA, NMBA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA) v Losartan API dle navrhované USP obecné kapitoly <1469> (Procedure 3). Studie zahrnovala přípravu vzorků, kalibraci, stanovení LOQ a ověření přesnosti a opakovatelnosti metody.

Použitá metodika

Analytický postup zahrnoval:

• Extrahování 80 mg vzorku Losartan API do 1% formiové kyseliny ve vodě s přídavkem interních standardů.
• Separaci na UHPLC systému Nexera XS s kolonkou Raptor ARC-18 (150 × 3,0 mm, 2,7 µm) při 60 °C a průtoku 0,5 mL/min, gradientním programu založeném na 0,1% formiové kyselině ve vodě (A) a methanolu (B).
• Detekci na triple kvadrupólovém hmotnostním spektrometru Shimadzu LCMS-8045 s APCI rozhraním v pozitivním módu a MRM přechody pro všechny analyty a jejich izotopově značené interní standardy.
• Kalibraci na devíti bodech v rozsahu 0,66–90 ppb s vážením 1/C, hodnota koeficientu lineárního regresního vyrovnání R² > 0,997.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém: Shimadzu Nexera XS
• Kolonka: Raptor ARC-18, 150 × 3,0 mm, 2,7 µm
• MS detektor: Shimadzu LCMS-8045 triple kvadrupól
• Ionizační rozhraní: APCI, interface 270 °C, desolvation line 220 °C, heater block 220 °C
• Plyny: nebulizační 3 L/min, sušící 3 L/min
• MRM rychlost skenování 30 000 u/s, polarity switch 5 ms

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vynikající linearitu (R²>0,997) pro všechny analyty. LOQ se pohybovalo mezi 0,66 a 15,66 ppb, opakovatelnost na úrovni LOQ byla <25 % RSD. Recovery studie při LOQ úrovni ukázaly hodnoty 70,7–112,9 %, což splňuje kritéria USP <1469> (70–130 %). Reprezentativní chromatogramy potvrdily dostatečné oddělení a citlivost pro rutinní kontrolu nitrosaminů v API.

Přínosy a praktické využití metody

Implementovaná LC-MS/MS analýza umožňuje spolehlivou, přesnou a citlivou detekci nitrosaminů v léčivých látkách. Metoda je vhodná pro QA/QC procesy ve farmaceutickém průmyslu, zajišťuje splnění regulačních limitů a minimalizuje riziko kontaminace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k využití vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro širokospektrální screening, integraci automatizovaných přípravných stanic, aplikacím green chemistry pro úsporu rozpouštědel a k pokročilým datovým analýzám řízeným umělou inteligencí pro rychlejší vyhodnocení výsledků.

Závěr

Popsaná LC-MS/MS metoda splňuje požadavky USP <1469> na kvantifikaci šesti nitrosaminů v Losartan API. Ověření parametrů linearity, citlivosti, přesnosti a opakovatelnosti potvrzuje její vhodnost pro rutinní farmaceutickou kontrolu.

Reference

• Devika Tupe, Shailendra Rane, Deepti Bhandarkar, S. Saravanan, B. Karthikeyan: Quantitation of 6 Nitrosamines in Losartan API by LC-MS/MS, Shimadzu Application Note, May 2021
• United States Pharmacopeia General Chapter <1469> – Nitrosamines, USP