Analysis of Cyanocobalamin tablets, assay procedure 2 as per USP41-NF36 monograph, using Shimadzu Nexera X2 Fast LC system

Význam tématu

Cyanokobalamin neboli syntetická forma vitaminu B12 je klíčovou složkou v lékařských i volně prodejných přípravcích pro prevenci a léčbu nedostatku tohoto vitaminu. Spolehlivá a rychlá analýza obsahu cyanokobalaminu v tabletách je nezbytná pro zajištění kvality výrobků, splnění farmakopejních norem a bezpečnost pacientů.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit postup analýzy cyanokobalaminu v tabletách podle monografie USP41-NF36, postup 2, s využitím systému Shimadzu Nexera X2 Fast LC. Studie se zaměřila na optimalizaci chromatografických podmínek, přípravu vzorků a standardů, kontrolu systémových parametrů a vyhodnocení přesnosti a opakovatelnosti metody.

Použitá metodika

Pro chromatografii byla použita reverzní fáze UHPLC s column 2,1 mm × 10 cm, částice L1 o velikosti 1,7 μm. Mobilní fáze A byla vodný pufr na bázi hexanasulfonátu sodného upravený na pH 3,5, mobilní fáze B acetonitril. Gradient programu pokrýval rozmezí 1 % až 25 % B v čase 0,0–5,5 min, návrat na 1 % B do 8,0 min. Průtok činil 0,5 mL/min, teplota kolony 35 °C, objem injekce 15 μL, detekce UV při 361 nm.
Standardní roztok (1 μg/mL) byl připraven z referenční substance USP Cyanocobalamin RS. Tabletové vzorky byly jemně rozemlety, průměrná hmotnost obsahující 25 μg cyanokobalaminu extrahována vodou, sonikována 5 min, filtrována přes membránu 0,22 μm.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Shimadzu Nexera X2 Fast LC
• Kolona 2,1×10 cm, L1, 1,7 μm
• Autosampler s mikroobjemovými injektory
• UV detektor nastavený na 361 nm
• Pipety, Erlenmeyerovy baňky, membránové filtry 0,22 μm

Hlavní výsledky a diskuse

Retention time cyanokobalaminu činí 6,38 min. Systémová vhodnost ukázala %RSD retence 0,09 % a %RSD plochy 0,26 % u standardu, 0,19 % a 0,30 % u vzorku, faktory tailingu 1,51 (standard) a 1,43 (vzorek) a počet destiček >80 000. Všechny hodnoty splňují limity USP (<2 %). Chromatogramy šestinásobných replikátů prokázaly vynikající opakovatelnost a minimalizované carry-over.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje vysokorychlostní analýzu s vynikající přesností, nízkou spotřebou mobilní fáze a minimálním carry-over. Systém Nexera X2 poskytuje robustní platformu pro rutinní kontrolu kvality vitaminových tablet v průmyslových i klinických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat automatizaci předúpravy vzorků, adaptaci metody pro jiné vitamery B12 a aplikaci v multidimenzionální LC pro komplexní analýzu potravinových doplňků. Green LC přístupy a využití kapalin s nižším environmentálním dopadem mohou dále zlepšit udržitelnost metody.

Závěr

Studie prokázala, že Shimadzu Nexera X2 Fast LC systém je schopen rychlé a přesné kvantifikace cyanokobalaminu v tabletách v souladu s požadavky monografie USP41-NF36. Metoda splňuje kritéria systémové vhodnosti a nabízí vysokou propustnost i spolehlivost.

Reference

[1] USP Monograph, Cyanocobalamin Tablets, USP 41–NF36, Monograph 1114, Procedure 2.
[2] USP General Chapter 621, USP41–NF36, First Supplement.