Fully Automated Online Sample Preparation AND Quantification of Amiodarone from Whole Blood using CLAM-LC-MS/MS

Význam tématu

Amiodaron je klíčový antiarytmický lék používaný k léčbě a prevenci život ohrožujících poruch srdečního rytmu. Jeho účinnost je provázena rizikem závažných nežádoucích účinků, proto je nezbytné přesné monitorování koncentrace v krvi. Automatizovaná a rychlá analýza umožňuje klinickým laboratořím zpracovat velké množství vzorků i prioritní vyšetření, čímž se zlepšuje kvalita péče o pacienta.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a otestovat plně automatizovaný postup pro přípravu vzorku z celkové krve a kvantifikaci amiodaronu a jeho metabolitu desethyl-amiodaronu pomocí on-line vazby CLAM a LC-MS/MS. Hlavním benefitem byla optimalizace doby analýzy pod 2,5 minuty pro vysokou průchodnost a možnost okamžitého měření urgentních vzorků.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky celé krve pacientů byly centrifugovány a plazma přímo vložena do modulu CLAM pro automatizovanou extrakci a čištění. Následovala on-line injekce do LC-MS/MS.

• Chromatografie (UPLC): systém Nexera X2
  
• Eluenty: fáze A/C 0,2 % kyselina mravenčí; fáze B/D 70 % methanol + 30 % acetonitril + 0,2 % kyselina mravenčí
  
• Kolony: M&N Nucleodur C8 (5 cm) + Kinetex F5 (10 cm), teplota 40 °C, gradient pod 2,5 min
  
• Mass spectrometrie: LCMS-8050, ESI+, napětí +4 kV, teploty 300/250/400 °C, kolizní plyn 270 kPa, MRM režim

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou linearitu v rozsahu 0,5–3 ng/µl s koeficientem korelace r² = 0,9994 jak pro desethyl-amiodaron, tak pro amiodaron. Detekční limity dosahovaly 0,5 ng/µl, přičemž signál desethyl-amiodaronu dosahoval až 750 000 cps a amiodaronu 400 000 cps. Minimální interferenční šum v surové matrici krve byl zajištěn optimalizovaným dopředným čištěním a použitím předkolony. Doba analýzy pod 2,5 minuty umožňuje zpracování až desítek vzorků za hodinu.

Přínosy a praktické využití metody

Tato plně automatizovaná on-line metoda výrazně snižuje manuální zásahy, riziko chyb a dobu odezvy v klinických laboratořích. Umožňuje vysokoprůchodové kvantitativní stanovení amiodaronu a jeho metabolitu v krevním séru, včetně prioritizovaného zpracování urgentních vzorků. Metoda je vhodná pro rutinní terapeutické monitorování a farmakokinetické studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Vývoj modulárních a plně integrovaných on-line systémů bude pokračovat podporou širšího spektra klinických analyzovaných látek. Očekává se rozšíření metodologie na další lipofilní léky a jejich metabolity. Další optimalizace může zahrnovat zkrácení analýzní doby a zdokonalení softwarové automatizace vyhodnocování výsledků.

Závěr

Implementace CLAM-LC-MS/MS pro on-line přípravu vzorků a kvantifikaci amiodaronu v lidské krvi nabízí rychlou, spolehlivou a vysoce průchodnou metodu pro klinické laboratoře. Výborná liniarita, nízké detekční limity a možnost automatizovaného urgentního měření potvrzují její význam pro terapeutické monitorování a zlepšení péče o pacienty.

Reference

• Bunse C., Kröner L. Fully Automated Online Sample Preparation and Quantification of Amiodarone from Whole Blood using CLAM-LC-MS/MS. ASMS 2017, ThP093.