Rapid Analysis of Mycophenolic Acid in Human Plasma Using an Agilent Triple Quadrupole LC/MS/MS System with Automated Online Sample Cleanup

Význam tématu

Mykofenolová kyselina (MPA) je klíčovým imunosupresivem používaným při transplantacích a léčení autoimunitních onemocnění. Přesná a citlivá měření hladin MPA v plasmě jsou nezbytná pro optimalizaci dávkování a sledování terapeutické účinnosti. Rozlišení MPA od jejího glukuronidního metabolitu (MPA-G) zabraňuje falešně zvýšeným koncentracím způsobeným in-source fragmentací.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout rychlou (4minutovou), vysoce specifickou a citlivou metodu pro kvantitativní stanovení MPA v lidské plasmě v přítomnosti MPA-G. Metoda využívá tandemovou hmotnostní spektrometrii (MRM) na Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS/MS s online automatizovaným čištěním vzorků.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek se připravuje jednoduchou precipitací proteinů (poměr plazma:precipitující činidlo 1:2 obsahující 0,4 M síran zinečnatý v methanolu). Po vortexování a centrifugaci se supernatant analyzuje online: ultrafast trapping na C18 koloně, následované analytickou separací na Poroshell C18. Kromě toho je mezi jehlu a vstřikovací ventilem vložen inline filtr pro zvýšení robustnosti.

MRM analýza probíhá v pozitivním ionizačním módu na Agilent 6460 s technologií JetStream. Deuterovaný standard MPA-d3 zajišťuje přesnou kvantifikaci. Kalibrace pokrývá rozmezí 0,1–25 µg/mL pro MPA a 0,49–125 µg/mL pro MPA-G, s použitím regresního váhování 1/x.

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity: Výborná linearita pro MPA (R2 >0,999) i MPA-G (R2 >0,993) při všech devíti kalibračních úrovních.
Účinnost separace: Chromatografické rozlišení MPA (ret. čas ~1,47 min) od artefaktu glukuronidu (1,13 min) eliminuje interferenci in-source fragmentace.
Přesnost a reprodukovatelnost: Intra- a inter-denní měření (n=20 a n=8) ukázala přesnost v rozmezí 97,9–104,9 % a variabilitu (CV) <5 %. Relativní odchylka retenčního času <0,5 % zajišťuje vysokou opakovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé a spolehlivé stanovování MPA přímo z plasmy bez časově náročné SPE extrakce. Online čištění minimalizuje matrix efekt a iontové potlačení, čímž je vhodná pro klinické laboratoře sledující terapeutické hladiny.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnost rozšíření metody na simultánní měření dalších imunosupresiv a jejich metabolitů. Integrace s vysoce výkonnými HRMS systémy pro širší metabolomické studie. Další automatizace přípravy a zpracování dat s využitím umělé inteligence pro optimalizaci analytických protokolů.

Závěr

Vyvinutá metodika představuje rychlé, citlivé a vysoce přesné řešení pro kvantifikaci MPA v lidské plasmě. Oddělení od MPA-G, jednoduchá příprava vzorku a automatizované online čištění zajišťují vysokou robustnost pro výzkumné i klinické aplikace.

Reference

• Côté L., Joseph S., Menon S., McCann K. Rapid Analysis of Mycophenolic Acid in Human Plasma Using an Agilent Triple Quadrupole LC/MS/MS System with Automated Online Sample Cleanup; Application Note, Agilent Technologies, Inc.; 2014.