Ultrafast Analysis of Methadone and Metabolite EDDP in Urine by the Agilent RapidFire High-Throughput Mass Spectrometry System

Význam tématu

Methadon je běžně sledovaný nejen v klinické, ale hlavně forenzní toxikologii. Jeho hlavní metabolit EDDP se v moči objevuje ve vyšších koncentracích a imunochemické testy pro něj často nejsou dostatečně citlivé. Roste tak potřeba rychlých, přesných a vysoce průchodných metod pro stanovení těchto analýtů v laboratorním prostředí.

Cíle a přehled studie

Tato studie prezentuje vývoj a validaci ultrarychlé metody pro kvantitativní stanovení methadonu a EDDP v moči využívajíc techniku RapidFire/MS/MS. Cílem bylo dosáhnout významného zkrácení doby analýzy oproti běžným LC/MS/MS protokolům, aniž by se snížila přesnost a linearita měření.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorků: 10 µl moči ředěné 1:100 v roztoku metanol:voda (1:1) s interními standardy (methadon-d3 a EDDP-d3).
• Instrumentace: Agilent RapidFire 360 v kombinaci s Agilent 6460 Triple Quadrupole MS, MassHunter Software (Data Acquisition, Qualitative a Quantitative).
• SPE modul: Cartridge E (reverzní fáze C18, G9205A), průtokové režimy s pufry obsahujícími formamidovou kyselinu a směsi organických rozpouštědel.
• MS/MS detekce: MRM přechody pro methadon a EDDP, optimalizovaná teplota, napětí a plynové parametry.

Hlavní výsledky a diskuse

• Rozsah stanovení: 10–5 000 ng/ml s koeficientem lineární regresní křivky R² > 0,995.
• Průchodnost: až 300 vzorků za hodinu při 11s injekčně-injekčním intervalu.
• Precizita a přesnost: vnitro- i mezi-denní CV < 5 %, odchylka < 10 % pro referenční levely (150, 750, 2 000 ng/ml).
• Carryover: zanedbatelné (< 0 %), při vyšších koncentracích doporučen jeden blank mezi vzorky.
• Maticové efekty: nezjistitelné (< 10 %) při srovnání standardů ve vodě a moči.

Přínosy a praktické využití metody

• Významně zrychlený screening a konfirmace methadonu a EDDP v forenzních laboratořích.
• Minimalizace spotřeby organických rozpouštědel a spotřebního materiálu díky jednoduchému ředění „dilute and shoot“.
• Vhodné pro rutinní analýzy v rámci QA/QC, klinických i toxikologických studií.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření metody na další drobné molekuly a metabolity ve vzorcích biologických tekutin. Integrace s plně automatizovanými robotickými linkami a rozvoj datové analýzy mohou dále zvýšit efektivitu a spolehlivost těchto vysoko-propustných protokolů.

Závěr

Metoda RapidFire/MS/MS umožňuje rychlou, citlivou a robustní analýzu methadonu a EDDP v moči. Díky vysoké průchodnosti a vynikajícím analytickým parametrům představuje cenný nástroj pro forenzní toxikologii a klinickou farmakokinetiku.

Reference

1. Feng J. et al. Simultaneous Determination of Multiple Drugs of Abuse and Relevant Metabolites in Urine by LC-MS-MS. Journal of Analytical Toxicology, 2007, 31:369–368.
2. Vlase L., et al. Bioanalysis of Methadone in Human Plasma and Urine by LC/MS/MS. Revue Roumaine de Chimie, 2008, 53(12):1157–1164.
3. Galloway E.R., Bellet N.F. Methadone Conversion to EDDP during GC-MS Analysis of Urine Samples. Journal of Analytical Toxicology, 1999, 23:615–619.